细胞生物学实验技术（章静波）（第三版）

本书前两版被许多院校用作教材，广受师生好评。新版保留了原有的大部分内容，涵盖显微镜技术、组织学基本技术、细胞结构与成分的显示技术、细胞生理实验、细胞培养与分析、干细胞培养及诱导分化、细胞周期分析、细胞成分的分离与分析、细胞工程基础技术、细胞凋亡的测定、染色体技术和分子细胞生物学技术。也根据反馈意见和当前研究热点，新增了类器官培养方法和适用于不同应用场景下的多种外泌体提取技术。这些新增内容不仅反映了技术方法的前沿性，更能让读者能够熟悉与掌握这些新的技术方法，以便在今后的研究中进行更深入和更高层次的探索。 新版继续将所介绍的方法分为基本方案、备择方案和支持方案三类，各个学校及有关研究机构可以根据具体情况和实验条件灵活选择和运用。 本书可以作为医药院校和相关高等院校的本科和研究生教材，也可供从事细胞生物学研究工作的人员阅读参考。

章静波，中国医学科学院基础医学研究所研究员、教授、博士生导师。《基础医学与临床》杂志主编。从事细胞生物学教学、科研50余年，出版有关著作或译著多部。

第一章显微镜技术1 基本方案1普通显微镜的构造及使用方法1 基本方案2相差显微镜的构造及使用方法6 基本方案3荧光显微镜的构造及使用方法8 基本方案4透射电子显微镜与超薄切片技术11 基本方案5扫描电子显微镜与样品制备15 备择方案1激光扫描共聚焦显微镜的构造及使用方法18 备择方案2激光捕获显微切割技术25 支持方案显微摄影技术27 第二章组织学基本技术30 基本方案1石蜡切片技术30 基本方案2冰冻切片技术32 基本方案3苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色技术33 备择方案1吉姆萨（Giemsa）染色技术35 备择方案2组织学切片的福尔根(Feulgen)染色技术35 备择方案3中性脂肪油红O显示（oil red O staining）技术37 备择方案4组织切片的碱性磷酸酶染色技术（ALP钙-钴法）38 备择方案5组织切片的琥珀酸脱氢酶染色（SDH staining）技术39 备择方案6组织切片的核酸甲苯胺蓝显示技术40 第三章细胞结构与成分的显示技术41 基本方案1细胞中DNA和RNA的显示41 基本方案2细胞中过氧化物酶的显示45 基本方案3细胞中碱性蛋白质的显示46 基本方案4一氧化氮合酶的显示47 基本方案5细胞中线粒体的活体染色51 基本方案6细胞中糖类和脂类的显示52 基本方案7酸性磷酸酶的显示54 备择方案1细胞中液泡系的活体染色55 备择方案2培养细胞完整生物膜系统的观察56 备择方案3微丝的染色及形态观察57 支持方案间接免疫荧光技术显示胞质微管59 第四章细胞生理实验62 基本方案1细胞的运动62 基本方案2细胞的吞噬活动63 基本方案3细胞自噬检测方法65 备择方案细胞膜通透性的测定68 第五章细胞培养和分析71 基本方案1细胞的原代培养71 基本方案2培养细胞的形态观察和计数74 基本方案3培养细胞生长曲线的绘制和分裂指数的测定77 基本方案4细胞集落形成实验79 基本方案5器官培养方法80 基本方案6鸡胚尿囊培养法83 备择方案1细胞的传代培养85 备择方案2MTT对细胞生长状况的检测86 备择方案3表皮细胞的培养87 备择方案4骨骼肌细胞的培养89 备择方案5内皮细胞的培养90 备择方案6神经胶质细胞的培养91 备择方案7骨髓间充质干细胞的培养及其体外诱导分化92 支持方案1细胞的冻存与复苏93 支持方案2细胞显微测量技术95 支持方案3细胞培养中支原体污染的检测96 支持方案4放射自显影术及同位素液闪测定100 第六章干细胞培养及诱导分化106 基本方案1人胚胎干细胞传代培养106 基本方案2人胚胎干细胞的诱导分化108 基本方案3肿瘤干细胞的分离纯化113 备择方案1诱导多能干细胞118 备择方案2类器官的培养与传代120 支持方案小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离及饲养层的制备123 第七章外泌体的提取和鉴定127 基本方案1细胞上清液准备127 基本方案2采用超速离心法提取外泌体128 基本方案3采用超滤法提取外泌体129 基本方案4采用电镜观察外泌体形态130 基本方案5采用纳米颗粒跟踪分析（NTA）鉴定外泌体粒径130 第八章细胞周期分析132 基本方案流式细胞仪检测细胞周期132 备择方案1细胞同步化实验134 备择方案2通过分析CDK的活性检测细胞周期135 第九章细胞成分的分离与分析139 基本方案1差速离心法分离细胞和细胞器139 基本方案2密度梯度离心法分离细胞组分141 基本方案3SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质143 基本方案4Western印迹技术144 备择方案免疫沉淀法146 支持方案蛋白质的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳147 第十章细胞工程基础技术152 基本方案1细胞融合实验152 基本方案2单克隆抗体的制备155 备择方案1染色体提前凝集标本的制备159 备择方案2显微注射技术（核移植）161 备择方案3DNA转染实验（绿色荧光蛋白）163 支持方案体外受精技术167 第十一章细胞凋亡的测定171 基本方案1凋亡细胞的普通光镜观察171 基本方案2凋亡细胞的荧光显微镜观察173 基本方案3凋亡细胞的琼脂糖凝胶电泳检测——DNA梯状条带175 备择方案1凋亡细胞的电镜观察176 备择方案2凋亡细胞的原位末端标记法检测177 备择方案3凋亡细胞的单细胞凝胶电泳检测178 备择方案4凋亡细胞的流式细胞法检测180 支持方案磷脂酰丝氨酸外化的流式细胞术分析181 第十二章染色体技术183 基本方案1染色体标本制备183 基本方案2端粒及端粒酶显示技术186 备择方案1染色体显带技术196 备择方案2性染色质的制备201 备择方案3姐妹染色单体交换实验204 备择方案4染色体原位杂交技术205 支持方案染色体实验试剂配制207 第十三章分子细胞生物学技术210 基本方案1DNA提取及检测210 基本方案2RNA提取及检测213 基本方案3Southern印迹技术214 基本方案4Northern印迹技术218 基本方案5RNA干扰技术221 基本方案6酵母双杂交技术225 备择方案1RT-PCR230 备择方案2原位PCR技术231 备择方案3荧光定量PCR技术234 备择方案4基因芯片技术236 备择方案5原位缺口平移技术241 备择方案6染色质免疫沉淀法243 备择方案7昆虫杆状病毒表达系统247 备择方案8GST pull-down分析251 参考文献254