生物工程基础实验指导(刘悦萍)

本教材由北京农学院生物与资源环境学院生物工程系及实验教学中心相关教师编写。全书内容共三章，分别为生物化学实验技术、分子生物学实验技术、细胞生物学实验技术。每章又分为基础实验、综合实验、创新实验三个层次的实验，涵盖了生物化学、分子生物学和细胞生物学的教学大纲要求，通过实验设计、实验材料、实验内容和实验操作等方面提升学生的理论知识、实践能力和创新能力。本教材在阐明相关实验内容的基础上，在附录中加入实验室安全相关知识等内容，增强教材的实用性。 本书可作为高等院校生物类各专业本科生和研究生生物化学、分子生物学、细胞生物学实验教材，也可供从事生物科学工作的有关人员参考。

刘悦萍，农学博士，2003年毕业于中国农业大学，硕士生导师。北京市科技新星，北京市中青年骨干教师，北京市属高等学校青年拔尖人才。主讲课程本科生课程：《生物化学》和《生物化学实验技术》，研究生课程：《生物化学与分子生物学》。主要从事果实优质生态安全的理论与实践的研究，对生长素调控果实发育成熟的分子机制及果实生态安全生产的具体实践措施开展相关的研究。累计发表学术论文30多篇，SCI收录10篇。主持完成国家自然科学基金2项，北京市自然基金1项、北京市教委项目1项，北京市委组织部项目1项，北京市“菜篮子”工程项目1项。参加北京市科委项目1项，北京市自然科学基金2项。

第一章生物化学实验技术001 第一节生物化学基础实验001 实验一考马斯亮蓝G-250染料结合法测定水溶性蛋白质含量001 实验二酶的特异性及温度和pH值对酶活性的影响004 实验三淀粉酶活性的测定008 实验四血红蛋白的凝胶过滤色谱011 实验五SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量014 实验六大肠杆菌16S rRNA基因的PCR及其琼脂糖凝胶电泳检测021 第二节生物化学综合实验024 实验一鸡卵黏蛋白的制备024 实验二胰蛋白酶粗提取与活性测定031 实验三亲和色谱纯化胰蛋白酶035 第三节生物化学创新实验040 实验一PcPKS1的原核表达和分离纯化040 实验二PcPKS1重组蛋白的浓缩和晶体生长049 第二章分子生物学实验技术055 第一节分子生物学基础实验055 实验一质粒DNA的分离与纯化055 实验二紫外分光光度法测定DNA浓度和纯度060 实验三琼脂糖凝胶电泳061 实验四DNA的酶切、回收与连接063 实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化065 第二节分子生物学综合实验068 实验一绿色荧光蛋白重组子的鉴定(菌落PCR法)068 实验二绿色荧光蛋白的诱导表达070 实验三绿色荧光蛋白的纯化072 第三节分子生物学创新实验074 实验一重组蛋白的表达075 实验二重组蛋白的纯化及鉴定077 实验三GST pulldown079 实验四免疫印迹081 第三章细胞生物学实验技术085 第一节细胞生物学基础实验085 实验一叶绿体的分离以及荧光显微镜的使用085 实验二细胞凝集反应089 实验三石蜡切片的制作及HE染色092 实验四动物细胞凋亡的诱导及检测095 第二节细胞生物学综合实验099 实验一植物细胞程序性死亡的诱导与形态观察099 实验二动物细胞融合102 实验三洋葱细胞骨架制备条件优化及影响因素研究104 第三节细胞生物学创新实验106 实验一动物细胞系的体外培养107 实验二GFP基因在HEK293T细胞中的转染与表达111 实验三免疫荧光技术研究蛋白质的亚细胞定位114 实验四利用荧光标记蛋白观察细胞自噬117 附录121 附录一实验室安全及防护知识121 附录二易制毒化学品目录122 附录三易制爆危险化学品目录124 附录四实验场地标志129 参考文献134