动物细胞培养工程实验指导（高等学校生物工程专业教材）

1.教材内容丰富，涵盖51个实验，帮助读者了解相关实验仪器、设备、技术，更好地开展实验。 2.本教材为《动物细胞培养工程》配套实验教材，兼顾理论性与实用性。

细胞培养工程技术与人类的发展息息相关，随着技术的不断进步，新的细胞产物不断出 现，并服务于人类生活。细胞培养工程技术与基因工程技术密切相关，细胞工程是基因工程的基础，又是基因工程的目的。它们通过各种手段培养和繁殖细胞，从而获得新性状、新个体、新物质或新产品。全书介绍了动物细胞培养工程的实验内容，包括动物细胞培养工 程实验室及基本要求、动物细胞培养工程基础实验，细胞库与细胞检定、动物细胞大规模培养技术、动物细胞培养工程应用技术和动物细胞基因工程应用技术。

乔自林 西北民族大学生物医学研究中心副主任，正高级实验师,硕士研究生导师。主讲“动物细胞工程”“组织与细胞培养技术”等课程。主要从事病毒类疫苗生产用细胞基质建立与评价、动物细胞生物反应器规模化培养技术等领域研究。主持或参与国家“重大新药创 制”科技重大专项、甘肃省科技重大专项等项目10余项，获甘肃省科技进步二等奖4项。主编/参编教材及专著2部。 刘振斌 西北民族大学生物医学研究中心讲师，硕士研究生导师。主讲“细胞生物学”“免疫学”课程。主要从事病毒类细胞基质疫苗的产业化关键技术等领域研究。主持或参与国家级项目、省部级项目和横向科研项目20项，获省级科技进步二等奖1项。发表论文15篇， 主编教材2部。

第一章绪论 第一节 动物细胞培养工程实验室管理要求 第二节 动物细胞培养工程实验室布局 第三节 动物细胞培养工程实验室的设施设备 第四节 无菌操作 第二章 动物细胞培养工程基础实验 实验一 细胞培养器材的准备 实验二 细胞培养液的配制与灭菌 实验三 原代细胞培养 实验四 体外培养细胞的观察和记录 实验五 细胞计数 实验六 细胞活力检查 实验七 细胞传代培养 实验八 细胞的冷冻保存 实验九 冻存细胞的复苏 实验十 绘制细胞生长曲线 实验十一 单细胞克隆及克隆率测定 实验十二 细胞分裂指数和贴壁率的测定 第三章 细胞库与细胞检定 实验一 细胞库建立 实验二 细胞形态学检查 实验三 培养细胞同工酶检测 实验四 动物细胞染色体核型分析 实验五 培养细胞无菌检查 实验六 支原体污染检査 实验七 内源病毒因子、 外源病毒因子检查 实验八 培养细胞成瘤性检查 实验九 致瘤性检查 第四章 动物细胞大规模培养技术 实验一 转瓶培养和细胞工厂培养 实验二 磁力转瓶微载体培养 实验三 生物反应器细胞培养 实验四 细胞的悬浮培养驯化 实验五 CHO 细胞的无血清培养驯化 第五章 动物细胞培养工程应用技术 实验一 病毒性弱毒细胞疫苗的制备 实验二 病毒性灭活疫苗的制备 实验三 动物细胞融合 实验四 单克隆抗体制备技术 实验五 细胞核移植 实验六 动物细胞生产基因重组蛋白 实验七 抗氧化药物筛选细胞模型的建立 实验八 红细胞评估药物体外溶血模型的建立 第六章 动物细胞基因工程应用技术 实验一 SDS 碱裂解法制备质粒 DNA 实验二 异丙醇法沉淀 DNA 实验三 动物细胞 RNA 的提取 实验四 mRNA 反转录产物 cDNA 的扩增 实验五 阳离子脂质体试剂介导的 DNA 转染 实验六 DEAE-葡聚糖介导的转染 实验七 电穿孔转染 DNA 实验八 直接克隆法构建重组腺病毒载体 实验九 直接克隆法构建重组腺病毒基因组 实验十 氯化铯梯度沉降法纯化重组腺病毒 实验十一 限制性核酸内切酶消化法鉴定纯化后的重组腺病毒基因组 实验十二 TCID50 终点稀释结合 qPCR 测定重组腺病毒感染滴度 实验十三 双链 siRNA 制备 实验十四 通过转染双链 siRNA 在哺乳动物细胞中进行 RNA 干扰 实验十五 体外转录法制备 dsRNA 实验十六 反转录定量 PCR 分析 miRNA 实验十七 在哺乳动物细胞中通过反义寡核苷酸抑制 miRNA 功能 参考文献