脂肪酸脱饱和酶的表达纯化及其功能活性研究

本书通过在血管内皮细胞中过表达低等生物的ω3去饱和酶基因比如△17(ω3)脂肪酸去饱和酶基因，将细胞内过多ω6多不饱和脂肪酸或者饱和脂肪酸催化转化为相应的ω3多不饱和脂肪酸，引导ω6ω3多不饱和脂肪酸比例的平衡，从而探讨脂肪酸脱饱和酶的抗氧化作用及其对损伤细胞的修复作用，为防治心血管疾病如动脉粥样硬化的发生奠定理论基础。

前言
第一章绪论
第一节多不饱和脂肪酸的概述
一、多不饱和脂肪酸简介
二、多不饱和脂肪酸来源
三、多不饱和脂肪酸的生物合成途径
四、ω3多不饱和脂肪酸功能性
第二节脂肪酸合成的关键酶——脂肪酸去饱和酶的概述
一、脂肪酸去饱和酶分类及结构
二、ω3脂肪酸去饱和酶基因
三、ω3脂肪酸去饱和酶的研究进展
第三节血管内皮细胞的概述
一、内皮细胞与动脉粥样硬化
二、血管内皮细胞生理功能
三、血管内皮损伤机制
四、内皮细胞损伤检测标志物
五、保护内皮细胞的因素
第二章Δ17脂肪酸去饱和酶的克隆及表达
第一节研究材料与方法概论
一、材料
二、实验方法
第二节Δ17脂肪酸去饱和酶全长基因及无跨膜结构基因的克隆及表达
一、Δ17FAD基因跨膜结构分析
二、脂肪酸去饱和酶Δ17FAD及Δ17FAD（NT）密码子优化及偏性分析
三、重组载体pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的构建
四、重组载体pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的酶切验证
五、毕赤酵母重组子的PCR鉴定
六、毕赤酵母重组蛋白表达鉴定
第三节结果与讨论
第三章基因结构改变对脂肪酸脱饱和酶功能活性影响
第一节研究材料与方法概论
一、材料
二、实验方法
第二节Δ17脂肪酸去饱和酶的纯化及功能验证
一、Δ17脂肪酸去饱和酶的纯化及质量检验
二、Δ17脂肪酸去饱和酶活性验证
第三节结果与讨论
第四章稳定表达脂肪酸去饱和酶的细胞株的构建及功能验证
第一节研究材料与方法概论
一、材料
二、实验方法
第二节稳定表达Δ17脂肪酸去饱和酶的HUVEC细胞株的构建及功能验证
一、慢病毒重组载体的构建及病毒颗粒滴度检验
二、慢病毒转染HUVEC细胞的荧光鉴定
三、Real-timePCR检测慢病毒感染效率
四、Δ17FAD表达对HUVEC细胞脂肪酸组成的影响
第三节结果与讨论
一、稳定高表达Δ17FAD的载体的选择
二、过表达Δ17FAD在HUVEC细胞中功能验证
第五章Δ17脂肪酸去饱和酶对HUVEC增殖凋亡及抗氧化应激的影响
第一节研究材料与方法概论
一、材料
二、实验方法
第二节Δ17脂肪酸去饱和酶对内皮细胞增殖凋亡及抗氧化应激的影响
一、Real-timePCR检测HUVEC细胞中Δ17FAD相对表达量
二、MTT检测细胞增殖
三、流式细胞仪检测HUVEC细胞凋亡
四、HUVEC细胞氧化应激指标检测
第三节结果与讨论
一、Δ17FAD对HUVEC凋亡的影响
二、Δ17FAD对HUVEC抗氧化应激的影响
第六章Δ17脂肪酸去饱和酶对损伤内皮细胞保护机制的探讨
第一节研究材料与方法概论
一、材料
二、实验方法
第二节Δ17脂肪酸去饱和酶对损伤内皮细胞保护机制的探讨
一、Δ17FAD对细胞分泌TNF-α、IL-6及ICAM-1水平的影响
二、Δ17FAD对血管舒张因子NO及内皮一氧化氮合酶eNOS的影响
三、Δ17FAD调控细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达
第三节结果与讨论
一、Δ17FAD通过调节炎症及黏附因子的表达来修复损伤HUVEC
二、Δ17FAD通过调控ENOS/NO通路修复损伤HUVEC
三、Δ17FAD通过调控凋亡相关蛋白来抑制HUVEC凋亡
参考文献