干细胞临床应用与质量安全

干细胞在合适条件或给予合适信号的诱导下，能够产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞，也能产生组成机体组织、器官的已特化的细胞，同时还能分化为祖细胞，医学界称其为“ 万能细胞”。在成体器官中，干细胞可以通过不断分裂来修复组织，或者是像在哺乳动物脑组织中那样处于静止的状态。近年来，干细胞技术在肿瘤、糖尿病、心脑血管疾病等治疗领域取得较多成果，为解决现代医学难题带来新的曙光。 为规范人体干细胞临床应用研究，2003 年3 月，我国发布《人体细胞治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》，要求临床试验计划和最终产品的整个操作过程必须制定严格的操作标准和程序，以确保体细胞治疗的安全性和有效性。截至2022 年，我国完成了超过100 项临床项目的备案，年度新受理10款干细胞Ⅰ类新药。但干细胞无论作为医疗技术还是药品制剂，安全性、有效性和质量可控性都是其必然的属性要求。 本书共6 章，从干细胞研发应用、安全评价、审评审批等工作角度，重点介绍了干细胞的特征原理、法规制度、临床应用、质量安全等内容，总结梳理了干细胞在不同疾病临床治疗中的应用效果，详细分析了干细胞在研发使用过程中存在的安全性和有效性问题，以期对相关研发、研究、监管、使用等人员提供有益的参考。 感谢中国食品药品检定研究院、间充质干细胞质控与应用开发河北省工程研究中心等单位予以指导、支持。本书难免存在不足或疏漏之处，希望各位专家、读者提出宝贵意见。

干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下可以分化成多种功能细胞，被视为21世纪的医学革命，是全球生命科学领域最重要的前沿技术之一。本书共7章，从干细胞研发应用、安全评价、审评审批等工作角度，重点介绍了干细胞的特征原理、法规制度、临床应用、质量安全等内容，总结梳理了干细胞在不同疾病临床治疗中应用效果，详细分析了干细胞在研发使用过程中存在的安全性和有效性问题，以期对相关研发、研究、监管、使用等人员提供有益的参考。

第一章 总述 …………………………………………………………………1
第五章 肿瘤干细胞疫苗 ……………………………………………… 140
第一节 肿瘤干细胞疫苗的研发与临床应用 ………………………… 140
一、肿瘤干细胞疫苗研发 ………………………………………… 140
二、干细胞疫苗临床应用 ………………………………………… 144
三、安全考虑 ……………………………………………………… 145
第二节 疫苗生产工艺关键控制点 …………………………………… 146
一、生产质量控制策略 …………………………………………… 146
二、上游生产工艺控制 …………………………………………… 148
三、下游生产工艺控制 …………………………………………… 151
第三节 重组蛋白疫苗成品指标检测 ………………………………… 154
一、鉴别试验——酶联免疫吸附法 ……………………………… 154
二、铝含量——氢氧化铝（或磷酸铝）测定法 …………………… 155
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目 录
三、游离甲醛含量——紫外-可见分光光度法 ………………… 156
四、效价测定——酶联免疫法 …………………………………… 157
五、异常毒性检查——豚鼠法和小鼠法 ………………………… 159
六、细菌内毒素检查——凝胶法 ………………………………… 160
七、抗生素残留量——间接竞争ELISA法 ……………………… 162
第四节 核酸类疫苗成品指标检测 …………………………………… 164
鉴别 …………………………………………………………………… 164
一、mRNA序列尺寸 ……………………………………………… 164
二、序列测定——NGS法 ………………………………………… 166
物理检查 ……………………………………………………………… 172
三、可见异物——《中国药典》2020年版三部通则0904
  可见异物检查法第一法（灯检法） …………………………… 172
四、不溶性微粒——《中国药典》2020年版三部通则0903
  不溶性微粒检查法第一法（光阻法） ………………………… 174
五、粒径及PDI——《中国药典》2020年版三部通则0982
  粒度和粒度分布测定法第三法（光散射法） ………………… 176
化学检定 ……………………………………………………………… 177
六、Zeta电位 ……………………………………………………… 177
七、包封率 ………………………………………………………… 178
八、mRNA纯度 …………………………………………………… 180
九、RNA浓度——《中国药典》2020年版三部通则0401
  紫外-可见分光光度法 ……………………………………… 182
十、蔗糖含量——高效液相色谱法 ……………………………… 183
十一、脂质含量——高效液相色谱法 …………………………… 185
十二、乙醇残留量 ………………………………………………… 187
十三、脂质杂质——高效液相色谱法 …………………………… 188
生物学活性 …………………………………………………………… 189
十四、生物学活性——ELISA法 …………………………………… 189
干细胞临床应用与质量安全
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细菌内毒素 …………………………………………………………… 191
十五、细菌内毒素——动态显色法 ……………………………… 191
第五节 新型疫苗成品通用指标检测 ………………………………… 193
一、外观——目视法 ……………………………………………… 193
二、装量——重量法和容量法 …………………………………… 194
三、渗透压摩尔浓度——冰点下降法 …………………………… 196
四、pH值——电位法 ……………………………………………… 197
五、无菌检查——无菌检查法 …………………………………… 199
第六章 展望 ……………………………………………………………… 205
第一节 干细胞临床应用领域的展望 ………………………………… 206
第二节 疫苗发展情况的展望 ………………………………………… 208
附录 …………………………………………………………………………… 209
附录1 细胞存活率检测 细胞计数法 ………………………………… 209
附录2 细胞标志蛋白检测免疫荧光染色计数法（仲裁法） ………… 211
附录3 细胞标志蛋白检测流式细胞术 ………………………………… 213
附录4 无菌检查法 ……………………………………………………… 215
附录5 支原体检查法 …………………………………………………… 218
附录6 HIV核酸检测法 ………………………………………………… 221
附录7 HBV检查 ………………………………………………………… 224
附录8 HCV检查 ………………………………………………………… 226
附录9 HCMV检查 ……………………………………………………… 228
附录10 国际标准ISO 24603：2022 人和小鼠多能性干细胞通用
     要求 …………………………………………………………… 230
附录11 GB/T 40365—2021 细胞无菌检测通则 ………………… 257
附录12 GB/T 38788—2020 猪多能干细胞建系技术规范 ……… 261