基础医学科学研究技能

本教材分上下两篇：上篇是基础实验部分，包括核酸、蛋白质和细胞的基本实验操作；下篇是高级实验部分，注重实验技术的原理及应用，包括流式细胞术、实时荧光定量PCR技术、免疫组织化学技术、激光扫描共聚焦显微术、扫描电子显微镜成像技术、冷冻电镜以及蛋白质层析系统。学生可以通过本教材内容掌握基本的理论知识，结合大型仪器的上机实践，从设计实验、获取数据、分析数据和凝练结论四个方面全流程学习基础医学的科学研究过程。

本教材可供高等院校基础医学及相关专业的本科生参考使用。

18.10-至今浙江大学基础医学院副院长2014/12-至今 浙江大学基础医学院免疫学系教授2012/12-2014/12 哈佛大学医学院免疫学系博士后

上篇
第一章 绪论1
第一节 基础医学科学研究技能课程概述1
第二节 实验报告和科研论文撰写要求2
第三节 生物实验室安全规范7
第四节 常用仪器的使用规范10
第二章 DNA的提取21
第一节 概述21
第二节 口腔上皮细胞DNA提取22
第三节 哺乳动物组织细胞基因组DNA提取24
第四节 质粒DNA小量提取27
第三章 聚合酶链反应的产物纯化、酶切和连接30
第一节 常规PCR及其产物的检测和纯化30
第二节 质粒构建——TA克隆36
第三节 质粒构建——常用表达质粒的构建38
第四节 拓展阅读40
第四章 质粒的克隆与转化46
第一节 氯化钙法制备感受态细胞47
第二节 化学转化法进行质粒转化49
第三节 拓展阅读51
第五章 质粒的提取及序列分析59
第一节 质粒提取与初步鉴定59
第二节 DNA序列分析62
第三节 拓展阅读69
第六章 重组蛋白的诱导表达与检测83
第一节 重组蛋白的诱导表达83
第二节 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳86
第三节 拓展阅读92
第七章 蛋白质分析常用方法96
第一节 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离鱼类蛋白质96
第二节 免疫印迹法99
第三节 分子筛层析102
第四节 拓展阅读104
第八章 细胞培养的基本技术110
第一节 原代细胞分离培养111
第二节 细胞传代培养114
第三节 细胞冻存116
第四节 细胞复苏119
第五节 拓展阅读121
第九章 常见的细胞实验126
第一节 细胞转染实验126
第二节 细胞划痕试验130
第三节 拓展阅读132
下篇
第十章 流式细胞术分析及分选技术138
第一节 流式细胞术的简介138
第二节 流式样本制备145
第三节 流式检测分析150
第四节 流式细胞术的注意事项154
第五节 流式细胞分析及分选技术的应用及实例解析155
第十一章 实时荧光定量PCR技术原理及应用165
第一节 实时荧光定量PCR的基本原理165
第二节 实时荧光定量PCR中的荧光物质168
第三节 实时荧光定量PCR的数据分析方法及实例分析171
第四节 实时荧光定量PCR的实验注意事项177
第五节 实时荧光定量PCR实验中的常见问题及解决方案180
第六节 实时荧光定量PCR技术的发展181
第七节 实时荧光定量PCR的应用184
第十二章 免疫组织化学技术的原理及应用186
第一节 免疫组织化学技术的概述及原理186
第二节 组织切片样本制备188
第三节 免疫染色实验191
第四节 经验总结197
第十三章 激光扫描共聚焦显微术的原理及应用202
第一节 激光扫描共聚焦显微镜简介202
第二节 样本制备205
第三节 成像检测211
第四节 图像处理和分析213
第五节 注意事项219
第十四章 扫描电子显微镜成像技术的原理及应用221
第一节 扫描电子显微镜成像技术的概况介绍及发展历史221
第二节 扫描电子显微镜的构造及成像原理221
第三节 扫描电子显微镜样品的制备及应用222
第十五章 冷冻电镜的原理及应用229
第一节 基本背景229
第二节 冷冻电镜术快速发展的原因230
第三节 单颗粒冷冻电镜三维重构技术232
第十六章 蛋白质层析系统的原理及应用238
第一节 蛋白质层析简介238
第二节 蛋白质层析系统的组成238
第三节 蛋白质层析的实验流程及注意事项240
第四节 蛋白质层析的实验设计及案例解析242