生物化学实验指导(第2版)

1.本书介绍多种重要的生物化学技术原理，并选编37个实验，涵盖生物化学研究中常用的方法，将基础理论有机渗透在实验中。 2.引入结构化PBL（问题式学习）实验模块，培养学生良好的科研思维和独立开展研究工作的能力。 3.配有17个常用设备及实验操作教学视频，可以扫描书中二维码观看，便于学生更好地理解实验原理，提升操作技能和科技素养。

本书包括生物化学实验室基础知识、生物化学技术原理、生物化学实验和结构化PBL实验，从实验基本操作和实验规范入手，强调对基础实验原理和常用实验内容的掌握。可作为高等学校食品科学与工程、生物工程等专业的实验课程教材，医药和农林等专业学生可根据各自特点选择使用，也可为相关教师进行PBL实验教学改革提供参考。

邱乐泉 副教授，硕士生导师，主要从事生物化学与生物化学实验教学，作为主要成员参与“生物化学”重量线上一流本科课程、“微生物学”省级精品课程建设。主编CAI电子课件1部，参编教材4部。 吴石金 教授，博士生导师，浙江省高校中青年学科带头人，“生物化学”重量线上一流本科课程负责人，重量虚拟仿真实验教学一流课程负责人，重量一流专业建设点负责人。主编教材5部。

第一部分 生物化学实验室基础知识
一、生物化学实验基本要求
(一) 实验记录
(二) 实验报告
(三) 实验报告评分标准
二、实验室基本操作
(一) 玻璃仪器的洗涤与清洁
(二) 塑料器皿的清洗
(三) 清洗液的原理与配制方法
(四) 量器类的使用方法
(五) 过滤方法
(六) 试管及离心管中液体的混匀操作
三、几种常规仪器设备的使用
(一) 分光光度计
(二) 电子天平
(三) 干燥箱和恒温箱
(四) 恒温水浴锅(槽)
(五) 离心机
第二部分 生物化学技术原理
一、生物大分子的制备及鉴定
(一) 盐析技术
(二) 透析和超滤
(三) 减压浓缩和冷冻干燥
二、层析技术
(一) 吸附层析
(二) 分配层析
(三) 离子交换层析
(四) 凝胶过滤层析
(五) 亲和层析
(六) 疏水作用层析
三、电泳技术
(一) 基本原理
(二) 影响泳动率的因素
(三) 电泳技术的种类
四、聚合酶链式反应(PCR)技术
(一) PCR 原理
(二) 常规PCR 反应体系与反应参数
(三) 反转录PCR
(四) 荧光定量PCR
第三部分 生物化学实验
一、基础实验
实验一 苯酚-硫酸法测定水溶性多糖
实验二 氨基酸纸上层析
实验三 糖的硅胶G薄层层析
实验四 磷脂的分离与鉴定——薄层层析法
实验五 甲醛滴定法定量测定氨基酸
实验六 蛋白质的两性反应和等电点的测定
实验七 蛋白质浓度测定
实验八 微量凯氏定氮法测总蛋白
实验九 核酸定量测定
实验十 维生素C定量测定——2,6二氯酚靛酚滴定法
实验十一 高效液相色谱法测定果蔬中的维生素C含量
实验十二 气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分
二、综合性实验
实验十三 蔗糖酶的提取及初提纯
实验十四 蔗糖酶的纯化——离子交换层析法
实验十五 蔗糖酶活力的测定
实验十六 蔗糖酶蛋白质含量测定及比活力计算
实验十七 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量
实验十八 蔗糖酶的固定化及活力测定
三、选择性实验
实验十九 底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定
实验二十 酶的特异性、温度及pH对酶活力的影响
实验二十一 大豆总异黄酮的提取及含量测定
实验二十二 类胡萝卜素的色层分析及鉴定
实验二十三 组织DNA的提取及定量测定
实验二十四 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验二十五 纸电泳法定量分析腺苷三磷酸
实验二十六 葡聚糖凝胶层析法测定蛋白质的相对分子质量
实验二十七 酶联免疫吸附实验(ELISA)测定乳汁中孕酮含量
实验二十八 血清蛋白质的层析分离——血清γ-球蛋白的分离纯化(分子筛层析法)
实验二十九 血清蛋白质的电泳分离——醋酸纤维素薄膜电泳
实验三十 脲酶的凝胶过滤分离纯化
实验三十一 血清蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳
实验三十二 肝糖原的提取和定量
实验三十三 蛋白质印迹分析
实验三十四 单向定量免疫电泳
实验三十五 Trizol法提取总RNA
实验三十六 聚合酶链式反应扩增目的DNA片段
实验三十七 两步法反转录聚合酶链式反应扩增目的DNA片段
第四部分 结构化PBL实验
一、结构化PBL
二、结构化PBL实验流程及教学要求
三、实施案例：蔗糖酶的分离纯化与鉴定
四、PBL实验报告组成与要求
附录
附录一 生物化学实验室规则
附录二 实验室安全及防护知识
附录三 常用数据表
参考文献