微生物学实验(第4版)

本书着重介绍微生物学实验的基本技术，适当增加了部分在生产、科研中常用的新技术。全书共94个常用实验，分为三部分：基础实验、综合实验和应用实验。基础实验突出微生物学实验的特点，系统介绍了微生物学实验的基本技术——无菌操作技术、显微技术、制片染色技术、纯培养技术、消毒灭菌技术、生长测定技术、生理生化实验技术、分子微生物学基础技术及免疫学技术等。综合实验介绍了常用的综合实验技术——抗生素效价及酶活力的测定、诱变育种、原生质体融合、细菌接合、应用微生物的分离与鉴定、噬菌体的分离纯化与效价测定及动物病毒的鸡胚培养等技术。应用实验结合生产和科研的实际，介绍了常用的应用实验技术——应用微生物的筛选、菌种保藏、食品及药品中微生物的检测、环境中微生物的检测、致癌剂的微生物法检测、固定化活细胞的制备及其发酵试验、高密度培养、发酵培养基配方试验、发酵条件的优选试验、台式自控发酵罐的发酵试验等。各单位可根据自己的教学要求和实际条件，选做相应的实验。书后附有相关染色液、试剂、溶液、消毒剂及培养基等的配制方法，还附有细菌鉴定及检索、常用菌种和病毒学名及饮用水、食品、药品等国家卫生标准等，方便使用。此外，授课教师通过书后教学课件索取方式可获赠教学课件一份。本书不仅适合作为生物科学、生物技术和生物工程等专业本科生微生物学实验课程的教材，还可以作为相关专业研究生和科研、生产技术人员的参考书。

前言
实验须知
第一部分微生物学基础实验
第一单元无菌概念和无菌操作技术
实验1-1环境及人体表面微生物的检测1
实验1-2无菌操作技术2
第二单元显微技术
实验1-3显微镜的使用及细菌形态的观察5
第三单元微生物制片及染色技术
实验1-4细菌的单染色法29
实验1-5革兰氏染色法30
实验1-6细菌的抗酸性染色法32
实验1-7细菌芽孢染色法33
实验1-8鞭毛染色法及活细菌运动性的观察34
实验1-9荚膜染色法36
实验1-10微生物拟核的体内和体外染色观察37
实验1-11细菌细胞壁的染色和质壁分离的观察39
实验1-12放线菌形态的观察40
实验1-13酵母菌形态及其子囊孢子的观察42
实验1-14霉菌形态及其接合孢子的观察44
实验1-15伞菌担子及担孢子形态的观察47
实验1-16昆虫病毒多角体的观察48
第四单元微生物纯培养技术
实验1-17培养基的制备50
实验1-18消毒与灭菌53
实验1-19微生物接种技术58
实验1-20微生物培养特征的观察与识别62
实验1-21厌氧微生物的培养66
实验1-22从土壤中分离与纯化微生物71
实验1-23显微操纵单细胞分离技术74
第五单元微生物的生长
实验1-24微生物大小的测定77
实验1-25显微镜直接计数法79
实验1-26平板菌落计数法82
实验1-27光电比浊计数法84
实验1-28大肠埃希氏菌生长曲线的测定85
实验1-29霉菌生长曲线的测定（干重法）87
实验1-30物理因素对微生物生长的影响88
实验1-31化学因素对微生物生长的影响91
实验1-32生物因素对微生物生长的影响93
第六单元细菌鉴定中常规生理生化反应
实验1-33用生长谱法测定微生物的营养要求95
实验1-34专享氮源（无机）试验96
实验1-35细菌鉴定中常用的生理生化反应97
第七单元分子微生物学基础技术
实验1-36细菌质粒DNA的小量制备102
实验1-37质粒DNA的转化105
实验1-38细菌总DNA的制备107
实验1-39SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定酿酒酵母菌胞外蛋白质相对分子质量109
实验1-40微生物DNA的体外重组112
实验1-41聚合酶链反应（PCR）技术113
实验1-42核酸分子杂交115
第八单元免疫学技术
实验1-43免疫血清的制备118
实验1-44凝集反应122
实验1-45环状沉淀反应125
实验1-46双向免疫扩散试验127
第二部分微生物学综合实验
实验2-1微生物抗药性突变株的分离129
实验2-2微生物的诱变育种131
实验2-3微生物的原生质体融合133
实验2-4营养缺陷型突变株的诱变、筛选与鉴定135
实验2-5细菌的接合作用138
实验2-6噬菌体的分离、纯化及其效价的测定140
实验2-7动物病毒的鸡胚培养144
实验2-8芽孢杆菌属（Bacillus）种的鉴定146
实验2-9利用Biolog系统鉴定微生物156
实验2-10微生物的快速、简易检测158
实验2-11抗生素效价的测定160
实验2-12产蛋白酶和淀粉酶芽孢杆菌的分离及酶活力检测162
第三部分微生物学应用实验
第一单元微生物的分离、纯化、筛选及保藏
实验3-1从病死虫体内分离杀虫微生物165
实验3-2真菌的单孢子分离法167
实验3-3嗜盐细菌的分离与鉴定169
实验3-4特别嗜盐菌甘油二醚类衍生物的测定170
实验3-5食用菌菌种的分离与选育172
实验3-6细菌DNA中（G＋C）mol%值的测定173
实验3-7菌种保藏177
第二单元食品、药品、化妆品微生物学检测
实验3-8食品中菌落总数及大肠菌群的检测184
实验3-9肉毒梭菌及肉毒毒素的检测188
实验3-10沙门氏菌属的检测191
实验3-11志贺氏菌属的检测195
实验3-12金黄色葡萄球菌的检测198
实验3-13食品中霉菌和酵母的计数200
实验3-14食品中霉菌毒素的检测202
实验3-15罐头食品商业无菌检测205
实验3-16牛奶中细菌的检查207
实验3-17药品微生物限度检查——细菌、霉菌及酵母菌计数210
实验3-18微生物限度检查方法——菌落计数法的验证212
实验3-19药品的无菌检查215
实验3-20药品中细菌内毒素的检查（鲎试剂法）218
实验3-21抗生素抗菌谱及抗生菌抗药性的测定222
实验3-22化妆品的微生物学检验224
第三单元微生物发酵技术
实验3-23固定化活细胞的制备及其发酵试验228
实验3-24微生物发酵培养基配方的正交试验231
实验3-25微生物摇瓶发酵条件的优选237
实验3-26台式自控发酵罐的发酵试验241
实验3-27高密度培养——乳链球菌的膜过滤培养245
实验3-28乳酸菌发酵制作酸奶及其分离纯化247
第四单元环境微生物学检测
实验3-29水的细菌学检查250
实验3-30利用发光细菌检测水体生物毒性253
实验3-31富营养化水体中藻类检测（叶绿素a法）256
实验3-32利用微生物吸附法去除水体中重金属258
实验3-33水中五日生化需氧量的测定260
实验3-34微生物传感器法测定BOD值262
实验3-35用埃姆斯试验检测诱变剂和致癌剂264
实验3-36空气中微生物的检测270
主要参考文献274
附录275