神经系统疾病临床试验样本处理方法

罗玉敏教授邀请我写这篇序言时，我的内心是十分忐忑的。我虽然当过7年 神经外科医生，做过30年基础研究，却从未亲自主持过任何一个临床研究课题， 担心完成不好罗教授交给我的任务。但我转念一想，这正是我学习提升自身的好 机会，便欣然接受了。 首先，感谢罗教授给我这次学习的机会。其次，这本书的出版与我的前同事和 好友 Michael J. Zigmond 教授密切相关。Michael 是畅销书、长销书《Fundamental Neuroscience》的主编之一，也是综述类杂志《Progress in Neurobiology》的前 主编，加上近20年每年来中国给研究生授课，相信国内很多神经科学工作者都相 当熟悉 Michael 以及他的著作对中国基础神经科学教育的贡献。然而，很少人知 道他曾经对中国临床医学研究的推动作用，他和Beth Fischer教授曾经有过一个 美国国立卫生研究院所属 Fogerty国际基金会资助的RO1, 专门用来培训中国临床 医学研究的管理人员和研究者，尽管他们的培训计划主要是关于临床医学研究的 伦理学和规范化，但他们多次呼吁尽快建立中国自己的、与国际接轨的临床医学 研究指南，尤其是临床神经病学研究的方法学。罗教授作为一个复旦大学医学院 和美国匹兹堡大学联合培养的神经病学博士生，与Michael 有师生之谊，正是受 他的影响，罗教授想出版一本中国自己的临床神经病学研究方法学方面的著作， 这正是她写本书的初衷。 我拜读接近书，认为这是一本临床神经病学、神经外科学以及神经病理学领 域急需的非常实用的工具书。近年来，在基础神经生物学发展的推动下，也得益 于各种高通量技术、分子影像学技术的飞速发展，神经系统疾病的临床研究方兴 未艾，但数以万计的临床研究者们，尤其是大批的临床医学专业研究生们所面临 的挑战之一是对临床研究的实验设计和样本处理及保存方法学缺乏规范化学习， 因为没有现成的详细指南或者标准程序可供参考，同时可检索的科学文献也往往 不能提供足够详尽的技术信息。例如，有人想用高通量手段寻找急性脑卒中后所 序 采集的生物样本中的生物标记物，用于预测脑卒中预后，这会遇到很多技术问题： 血样如何处理？脑脊液如何处理？有形成分和无形成分如何分离、处理、保存？ 如何获取高纯度某种淋巴细胞亚型？诸如此类问题的答案都可以轻易在这本著作 里找到。书中规范化的内容表达也会对临床研究论文的撰写提供极大的便利。 不难看出，罗教授和其他编者们在本书的材料收集、整理、分析和撰写过程 中付出了巨大努力，充盈于各个章节中的几万个技术细节更是需要海量的时间和 精力来进行核实校准。我相信，得益于此书的同仁们会对本书的编者们表达深深 的谢意和敬意。 “细节决定成败”是适用于科学界的一句哲理，因此失败并不是专享的成功之 母，讲究细节才是。感谢罗教授和其他编者们为中国的临床神经病学所作出的 贡献。 在此，祝贺此书的出版！ Richard K. Mellon 讲席教授 美国匹兹堡大学医学中心脑疾病& 康复研究所所长 陈  俊 2022年4月

本书围绕神经系统疾病，主要介绍了外周血、细胞外液等样本的留取及分离方法，包括血浆、血清、各种外周血细胞、脑脊液以及尿液等样本的处理方法，系统总结了周围组织样本的留取，包括周围神经、肌肉、血管的分离及保存方法；以及相关的DNA、RNA、蛋白质的提取方法，并列举了相关的临床试验研究应用实例。本书为卒中、阿尔茨海默病、帕金森病、重症肌无力等神经系统疾病临床研究样本留取方法的选择提供了重要信息，为临床医生、医学研究人员、药物研究者、研究生以及生物工作者提供重要参考。

罗玉敏，博士，首都医科大学神经病学系主任医师、教授、博士研究生导师，研究方向为中医药对脑缺血损伤保护的研究。首都医科大学脑血管病研究所副所长，宣武医院脑血管病研究室主任北京市中西医结合学会神经科专业委员会主任委员；北京市神经病学学会中西医结合分会副主任委员。发表国内外论文近300篇，其中SCI论文90余篇。主编《脑血管病实验方法学》《神经系统疾病动物模型》《合理使用治疗神经系统疾病的中药》等著作。

第一章 神经系统疾病
一、概述
二、临床样本在神经系统疾病临床研究中的重要意义
第二章 临床样本概述
一、概念
二、演绎
三、在实践中的重要作用
第三章 外周血样本的留取方法及应用
第一节 外周血在临床试验中的重要性
第二节 外周血浆的留取方法
第三节 外周血清的留取方法
第四节 血中活细胞样本的留取方法
一、中性粒细胞
二、淋巴细胞
三、单核- 巨噬细胞
四、血小板
第五节 外周血DNA的留取方法
一、全血中有形成分DNA
二、血浆、血清DNA
第六节 外周血RNA的留取分离方法
一、全血中有形成分RNA
二、血浆、血清RNA
第七节 外周血在神经系统疾病临床研究中的应用实例
一、血浆和血清应用实例
二、外周细胞检测应用实例
三、外周血核酸检测应用实例
第四章 细胞外液样本的留取方法及应用
第一节 细胞外液样本在临床试验中的重要性
第二节 脑脊液
一、脑脊液DNA
二、脑脊液RNA
三、脑脊液细胞
四、脑脊液蛋白
第三节 尿液
一、尿液细胞
二、尿液外泌体
三、尿液蛋白
四、尿液DNA
五、尿液RNA
第四节 细胞外液在神经系统疾病临床研究中的应用实例
一、脑脊液应用实例
二、尿液应用实例
第五章 中枢组织样本的留取方法及应用
第一节 中枢组织样本在临床试验中的重要性
第二节 脑组织
一、脑组织冻存样本
二、脑组织切片样本
第三节 脑组织活细胞样本
第四节 脑血管动脉粥样硬化斑块组织样本
一、斑块组织冻存样本的保存
二、斑块组织切片样本的留取
第五节 中枢神经组织样本临床研究应用实例
一、中枢神经组织样本应用实例
二、血管斑块组织样本应用实例
第六章 周围组织样本的留取方法及应用
第一节 周围组织样本在临床试验中的重要性
第二节 肌肉样本的留取
一、冻存
二、切片
第三节 周围神经样本
一、电镜标本制备
二、切片
第四节 周围血管冻存样本、切片样本
一、血管组织冻存样本的保存
二、血管组织切片样本的留取
第五节 周围血管活细胞样本
一、血管内皮细胞的分离方法
二、血管平滑肌细胞的分离方法
第六节 周围组织样本在神经系统疾病临床研究中的应用实例
一、周围神经应用实例
二、肌肉标本应用实例
三、血管标本应用实例
参考文献