生物化学与分子生物学实验 第2版

生物化学与分子生物学是生命科学的前沿学科，其理论与基本实验技术已广泛渗透并应用于生命科学的各个领域。掌握生物化学与分子生物学的基本实验技术不仅是医学生的推荐能力，也是实施创新教育的重要手段。
为培养学生的动手能力、独立分析问题和独立解决问题的能力，本教材在介绍生物化学与分子生物学基本实验操作和常用技术及仪器使用的基础上，根据实验内容的特点，将实验分成经典验证性实验、综合性实验、研究性实验和创新性实验，为本科生进行基本的科研训练提供帮助，并为开展创新性实验和科学研究提供思路。本教程也可供医学相关专业的本科生、研究生和科研工作者参考。

前言
概述1
一、生物化学与分子生物学实验课的性质、任务与目的1
二、生物化学与分子生物学实验室安全与规则1
三、实验报告书写2
第一章基本实验操作与常用技术及仪器的使用3
第一节基本实验操作3
一、玻璃器皿的洗涤与干燥3
二、移液器的使用4
三、液体的混匀6
四、沉淀的分离6
五、常用生物材料的处理7
第二节常用技术及仪器的使用9
一、离心技术与离心机9
二、分光光度分析技术与分光光度计及酶标仪10
三、电泳技术与电泳仪12
四、层析技术与层析柱16
五、体外DNA扩增技术与PCR仪20
第二章经典验证性实验26
实验一蛋白质的盐析作用26
实验二乳酸脱氢酶及其辅酶Ⅰ的作用27
实验三血清谷丙转氨酶活性的测定29
实验四血糖浓度测定32
一、Folin-吴氏法32
二、葡萄糖氧化酶偶联法（GOD-POD法）34
实验五胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响36
实验六运动对尿中乳酸含量的影响37
实验七酮体的生成和利用39
实验八胆固醇提取定性40
实验九血清总胆固醇的测定42
一、醋酐-硫酸单一试剂显色法测定总胆固醇42
二、氧化酶法测定血清总胆固醇43
第三章综合性实验45
实验十蛋白质含量的测定45
一、紫外分光测定法45
二、Lowry法测定蛋白质含量46
三、考马斯亮蓝法48
实验十一血清LDH同工酶谱分析49
一、乙酸纤维素薄膜电泳法50
二、琼脂糖凝胶电泳法52
实验十二碱性磷酸酶Km值的测定55
实验十三碱性磷酸酶分离纯化及比活性的测定57
一、碱性磷酸酶的提取分离和纯化58
二、碱性磷酸酶比活性的测定60
实验十四DNA琼脂糖凝胶电泳63
实验十五聚合酶链式反应技术（PCR）体外扩增DNA64
实验十六质粒DNA的制备（碱变性法）66
实验十七血清蛋白质的电泳分离69
一、血清蛋白质乙酸纤维素薄膜电泳69
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳（圆盘电泳）71
实验十八SDS-PAGE电泳测定蛋白质的相对分子量75
实验十九蛋白质印迹79
第四章研究性实验82
实验二十凝胶过滤层析法分离纯化脲酶82
实验二十一离子交换层析法分离血清蛋白质86
实验二十二RT-PCR技术87
一、总RNA的提取87
二、RT-PCR89
实验二十三真核生物基因组DNA的提取与鉴定90
实验二十四基因克隆及蛋白原核表达92
第五章创新性实验96
实验二十五食管癌PAX9基因的克隆及重组载体构建96
实验二十六支架蛋白RACK1小干扰RNA抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭102
附录106
附录1常用溶液的配制106
附录2常用培养基的配制111
彩图