分子生物学实验(第2版)

通过分子生物学实验，系统培养学生在分子生物学领域基本技术和技能，通过学生的独立实验设计和实践，培养学生的创新思维和独立分析问题、解决问题的能力。该教材的部分实验项目来自编者所在高校开设的特色分子生物学实验。

本教材分为三部分，共13章：第一部分分为4章，介绍分子生物学实验基础知识，包括实验室规则、实验室安全知识、常用仪器及其使用、常用培养基和抗生素溶液的配制，以及GenBank数据库；第二部分介绍分子生物学常用实验技术，从第5章到第10章，含11个实验，分别介绍质粒的提取、酶切、电泳、转化、重组及鉴定、PCR技术、核酸杂交技术、外源基因的表达及分离纯化技术；第三部分为分子生物学综合性、研究性实验，从第11章到第13章，含 6个实验。本书可供生物类、农学类、食品类、药学类等专业的本科院校师生，科研院所科研人员和企事业单位技术人员等使用

李峰，男，1966年11月出生，博士，博士后，教授，湖南省生物化学与分子生物学学会理事，湖南生物信息学会理事。2004年毕业于中南大学肿瘤研究所，获病理学与病理生理学医学博士学位。现在湖南文理学院生命与环境科学学院从事生物化学、分子生物学、生物信息学、基因工程、疾病与健康等课程的教学及科研工作，2006年至2015年任湖南文理学院生命科学学院副院长。先后参与多项国家自然科学基金项目，承担湖南省教育厅科学研究项目、湖南省自然科学基金项目、湖南省高校创新平台项目。主要从事肿瘤免疫学方面的研究工作，在肿瘤免疫细胞治疗产品的研发有较为丰富的经验。在国内外学术期刊上发表学术论文30多篇，多篇论文被SCI收录。

第一部分分子生物学实验基础知识
第1章分子生物学实验室规则和安全/2
1.1实验室一般规则/2
1.2实验室常识/2
1.3实验室安全基础知识/3
1.4实验室合理设计和布局/4
1.5实验室急救/4
1.6废弃物、放射性物质及有毒物质的处理/5
第2章分子生物学实验常用仪器设备及其操作/7
2.1分子生物学实验常用仪器设备/7
2.2冷冻离心机/8
2.3电泳仪/9
2.4分析天平/10
2.5分光光度计/10
2.6数字式酸度计/11
2.7普通PCR仪/12
2.8实时荧光定量PCR仪/13
2.9凝胶成像系统/14
2.10多功能微孔板酶标仪/15
2.11摇床/16
2.12水的净化装置/16
2.13消毒设备/17
第3章细菌培养常用培养基和抗生素溶液的配制方法/19
3.1常用培养基的配制方法/19
3.2常用抗生素溶液的配制方法/20
第4章GenBank数据库简介/22
4.1概述/22
4.2GenBank的建立与发展/23
4.3GenBank数据库结构/25
4.4基因基本信息检索/29
4.5GeneBank在分子生物学中的应用/30
第二部分分子生物学常用实验技术
第5章核酸的制备/36
5.1核酸制备的原理与方法/36
5.2质粒的生物学特性/39
5.3常用克隆载体的特征/41
实验1真核生物基因组DNA提取/42
实验2总RNA的提取及鉴定/44
实验3质粒DNA的微量提取和鉴定/48
第6章DNA的酶切和凝胶电泳/51
6.1性核酸内切酶的特性及应用/51
6.2琼脂糖凝胶电泳/53
6.3聚丙烯酰胺凝胶电泳/55
实验4DNA的性核酸内切酶酶切及凝胶电泳/57
第7章DNA转化/61
7.1感受态细胞的制备/61
7.2转化/61
实验5大肠杆菌感受态细胞的制备和转化/63
第8章DNA重组的基本流程和方法/68
8.1目的基因的获取/68
8.2DNA分子的体外重组/69
8.3DNA重组体的导入/70
8.4受体细胞的筛选/72
8.5基因表达/73
实验6DNA片段的黏性末端连接法/74
实验7DNA片段的黏-平端连接法/75
实验8重组子的筛选与鉴定/77
第9章聚合酶链式反应技术/80
9.1常规PCR技术的原理及操作/80
9.2引物设计原则及合成/84
9.3PCR产物的纯化与鉴定/85
9.4PCR技术的延伸及应用/87
实验9PCR扩增特异性DNA片段及扩增产物的纯化与鉴定/91
实验10实时荧光定量PCR技术检测基因的表达量/93
第10章核酸杂交技术/98
10.1几种核酸探针标记方法/98
10.2核酸探针制备和纯化技术/101
实验11核酸探针制备和纯化/109
实验12菌落原位杂交法/112
实验13miRNA原位杂交/114
第三部分分子生物学综合性、研究性实验
第11章外源基因的表达/118
11.1外源基因在原核生物中的表达/118
11.2外源基因在酵母细胞中的表达/125
实验14外源基因在大肠杆菌中的诱导表达/130
实验15SDS-PAGE电泳检测表达的外源蛋白/131
实验16脂肪酶基因在枯草杆菌中表达及表达产物的研究/133
实验17外源基因在酵母细胞中表达及表达产物的研究/135
第12章利用分子生物学技术进行细菌的种属鉴定/137
12.1微生物分类鉴定方法的发展/137
12.216S rDNA分类鉴定技术的原理/138
实验18利用16S rDNA序列分析技术进行细菌种属的鉴定/139
第13章基因表达差异的分析/144
13.1差减杂交/144
13.2mRNA差异显示反转录PCR/145
13.3cDNA代表性差异分析/145
13.4差减抑制消减杂交方法/146
实验19半定量RT-PCR技术检测基因的表达差异/147
附录/152
附录A常用单位及换算方法/152
附录B常用核酸、蛋白质换算数据/152
附录C核酸的单位及有关数据/153
附录D常见核酸分子的长度和相对分子质量/153
附录E色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动参数/154
参考文献/155