轮状病毒VP7基因植物表达技术研究

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本书适应当前医药、生命科学等学科的发展新形势，力求在理论与实践结合的基础上，比较全面地向读者介绍轮状病毒表达技术研究方法和手段，以及植物生物反应器生产药物的研究进展。按表达系统、表达技术过程，介绍了轮状病毒VP7原核表达技术、拟南芥表达轮状病毒VP7技术、红花表达轮状病毒VP7技术，以及拟南芥表达产物的免疫学检测；结合作者的科研实践，介绍了轮状病毒在大肠杆菌、模式植物拟南芥、药用植物红花中的表达技术研究，具有一定的文献价值和技术参考价值。 本书适合从事生物技术工作的科研人员及相关专业的师生阅读参考。

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第1章 轮状病毒研究概况
1.1 轮状病毒的危害
1.2 轮状病毒的基本特性
1.3 轮状病毒蛋白特征
1.4 轮状病毒的血清学分类
1.5 轮状病毒疫苗的发展概况
1.6 轮状病毒疫苗的效果和有效性
第2章 植物生物反应器生产药用蛋白研究进展及霍乱毒素B亚基（CTB）与连接肽介绍
2.1 植物生物反应器生产药用蛋白概况
2.2 植物生产药用蛋白的优势和面临的挑战
2.3 植物生产药用蛋白的技术平台
2.4 植物生产疫苗
2.5 霍乱毒素B亚基（CTB）与连接肽
第3章 轮状病毒外壳蛋白VP7在原核中表达的研究
3.1 原核表达材料和仪器设备
3.2 HRVVP7基因序列合成及克隆载体构建
3.3 构建pET-22b-HRVVP7原核表达载体
3.4 HRVVP7原核表达条件优化及表达产物的存在形式
3.5 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测
3.6 HRVVP7纯化
3.7 免疫印迹法检测
3.8 基因序列合成及克隆载体构建结果
3.9 pET-22b-HRVVP7原核表达载体构建结果
3.10 HRVVP7原核表达条件优化及表达产物的存在形式结果
3.11 HRVVP7纯化结果
3.12 蛋白免疫印迹检测结果
第4章 拟南芥表达轮状病毒外壳蛋白VP7的研究
4.1 拟南芥表达实验材料及仪器准备
4.2 构建pPhaP3301-HRVVP7-linker-CTB和pPhaP3301-HRVVP7植物表达载体
4.3 转化拟南芥与筛选
4.4 转化拟南芥的分子生物学检测
4.5 HRVVP7-linker-CTB核酸序列合成及优化结果
4.6 PCR扩增HRVVP7核酸序列结果
4.7 pEASY-T1-HRVVP7载体构建结果
4.8 构建pPhaP3301-HRVVP7-linker-CTB和pPhaP3301-HRVVP7植物表达载体结果
4.9 农杆菌的转化及鉴定
4.10 拟南芥阳性植株的筛选
4.11 转基因拟南芥在转录水平上的表达分析
4.12 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果
4.13 蛋白免疫印迹检测结果
4.14 酶联免疫吸附剂测定分析外源蛋白的表达量
第5章 红花种子表达轮状病毒外壳蛋白VP7的研究
5.1 红花表达实验材料及试剂准备
5.2 pPhaP3301-HRVVP7质粒冻融法转化农杆菌
5.3 红花的遗传转化
5.4 抗性苗嫁接
5.5 转基因植株的基因组PCR鉴定
5.6 BCA法测定红花种子中总蛋白浓度
5.7 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测红花种子中HRVVP7蛋白的表达
5.8 蛋白免疫印迹检测红花种子中HRVVP7蛋白的表达
5.9 酶联免疫吸附剂测定检测红花种子中HRVVP7蛋白的表达水平
5.10 转基因红花苗的获得
5.11 转基因红花叶片PCR检测结果
5.12 BCA测定总蛋白
5.13 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测种子蛋白表达结果
5.14 蛋白免疫印迹检测种子蛋白表达结果
5.15 酶联免疫吸附剂测定检测种子蛋白表达水平
第6章 转基因拟南芥种子的免疫学检测
6.1 免疫检测实验材料及仪器准备
6.2 转基因拟南芥植株总蛋白量测定
6.3 动物免疫
6.4 小鼠产生HRVVP7抗体效价测定
6.5 抗体中和实验
6.6 乳鼠攻毒实验
6.7 数据统计与分析
6.8 转基因拟南芥种子总蛋白提取与蛋白含量测定
6.9 小鼠免疫后产生HRVVP7抗体效价测定
6.10 HRVVP7抗体中和病毒效果分析
6.11 乳鼠攻毒后观察统计
参考文献
附录 轮状病毒相关知识简介