生物技术药物学实验

本书着重介绍了重组药物表达载体的设计思路和基本实验流程，以及与蛋白药物的诱导表达、鉴定、纯化及活性检测相关的实验。此外，本书还涵盖了与基因工程密切相关的生物信息学分析及基本的细胞培养、传代，免疫组化，免疫荧光等细胞生物学实验。

王峰，暨南大学药学院生物制药系制药工程教研室主任，副教授，曾主持国家自然科学基金、广东省自然科学基金、广东省教育厅科技创新项目、广东省医学科研基金、广东省中医药局科研课题等项目，在Theranostics、BBA-GeneRegulatory Mechanisms、European Journal ofPharmacology等刊物发表论文50余篇。 主要负责硕士研究生“生物技术制药”以及本科生“生物技术药物学”“生物技术药物学实验”等课程的教学工作。承担省级和校级教改课题多项，发表教改论文多篇，获校级教学成果二等奖。指导本科生获广东省“挑战杯”大学生课外学术科技作品竞赛三等奖。担任教育部学位与研究生教育发展中心评审专家、广东省自然科学基金评审专家、广东省科技计划项目评审专家，以及British Journal ofPharmacology、Cellular Physiology andBiochemistry、European Jourmal of Pharmacology等刊物的通讯审稿人。

前言
第一章 生物信息学
实验1 目的基因的基因组DNA序列和mRNA序列查找
实验2 蛋白质或多肽分子量和等电点分析
实验3 引物设计
实验4 PDl抗体可变区及cDR序列的分析
实验5 翻译蛋白质序列
实验6 新冠病毒RBD结构域氨基酸序列的密码子优化设计
实验7 核酸及氨基酸序列比对(以IL2基因和EPO蛋白为例)
实验8 TCGA检测基因在肿瘤组织中的表达及其与生存率的关系
第二章 基础实验
实验1 哺乳动物细胞的传代培养和计数
实验2 淋巴细胞分离实验
实验3 荧光定量PCR检测PTBP1基因的表达
实验4 RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)技术
实验5 免疫荧光
实验6 免疫组化
实验7 HE染色
第三章 目的基因的获取和载体构建实验
实验1 nizol法提取RNA
实验2 反转录
实验3 大肠杆菌质粒的提取和琼脂糖凝胶电泳检测
实验4 PCR扩增目的基因片段
实验5 定点突变PcR
实验6 重叠延伸PcR
实验7 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
实验8 质粒载体的酶切消化
实验9 大肠杆菌DH5α感受态的制备
实验10 同源重组连接及转化
实验11 菌液PCR鉴定重组子
第四章 生物药物的提取、表达、纯化和鉴定实验
实验1 蛋白质诱导表达及sDs—PAGE电泳
实验2 亲和层析纯化His标签anti—PDu scFv蛋白
实验3 anti—PDlJl scFv蛋白的透析
实验4 ELISA法检测小鼠血清中的TNF-α的水平
实验5 BcA法测定蛋白质浓度
实验6 Western Blot检测
实验7 人血白蛋白的分离与纯化
实验8 吸附法制备细胞色素c粗品
第五章 生物药物活性检测实验
空赊1 SOD活件测定
实验2 CCK-8法检测bFCF对成纤维细胞增殖的影响
实验3 反义核酸的转染
实验4 双荧光素酶法测定Ⅰ型干扰素的活性
实验5 胰岛素对BALB／c小鼠的降血糖作用
实验6 划痕实验检测药物的抗迁移作用
实验7 Transwell实验检测趋化因子的趋化作用
实验8 水蛭素对血凝时问的影响
实验9 溶菌酶抑菌圈的观察
实验10 重组链激酶生物学活性测定
附录
生物技术药物学实验室规则
常用溶剂配制
常用引物
基因序列
载体图谱
Marker条带
参考文献