数字PCR 方法和方案

作为近期新一代的聚合酶链式反应（PCR）技术，数字PCR在继承普通PCR和荧光定量PCR技术优势的基础上，通过采用并行反应单元，可以实现目的核酸的绝对定量，并提升检测的敏感性，在很多领域都有令人期待的应用前景。近年来，数字PCR检测的应用场景不断增加，如何更好地进行方法学设计并确保结果的稳定，是其未来发展不得不面对的关键问题。本书系统介绍了数字PCR的基本概念，及其在各种应用场景下的优势、实施细节及注意事项，实用性强。本书将为基础和转化研究相关的遗传学、分子生物学、病毒学、免疫学、肿瘤学、病理学研究人员及临床医生和诊断专家提供帮助，同时也适合从事临床药物及诊断试剂研发、生产及销售等工作的企业人员阅读和使用。

第Ⅰ部分 概念背景
第1章 进入21世纪分子生物学工具的神殿：数字PCR的前景 3
第2章 数字PCR检测的基本概念和验证 9
第3章 数字PCR中计算统计的基础：只测量两个靶点拷贝——这意味着什么 20
第4章 评估血浆中循环游离DNA提取物的质控品和数字PCR方法 35
第Ⅱ部分 绝对定量
第5章 用于转基因玉米事件定量的多重微滴数字PCR方案 55
第6章 采用微滴数字PCR检测临床样本中人类疱疹病毒6A与6B型的共感染 77
第7章 脑脊液中的生物标志物：通过数字PCR分析游离循环线粒体DNA 87
第8章 在水中检测常规和人类相关粪便的污染 99
第Ⅲ部分 拷贝数变异
第9章 采用微滴数字PCR分析拷贝数变异 113
第10章 在血浆cfDNA中评估HER2扩增 126
第11章 采用微滴数字PCR在原发体细胞组织中对嵌合体基因组DNA变异进行检测和定量：分析嵌合体转座元件插入、拷贝数变异和单核苷酸变异 136
第Ⅳ部分 稀有突变和稀有等位基因的检测
第12章 采用微滴数字PCR在EGFR突变的肺癌患者血浆中监测疗效和耐药 153
第13章 在早期和转移性乳腺癌患者中检测癌症DNA 165
第14章 采用微滴数字PCR在成熟淋巴组织增殖性疾病中检测微小疾病残留 180
第15章 采用QuantStudioTM 3D数字PCR系统对JAK2 V617F等位基因负荷进行定量 204
第16章 采用数字PCR对稀有等位基因进行定量的新型多重策略 218
第17章 鉴别和使用个体化的基因组标志物进行循环肿瘤DNA的监测 239
第18章 单色多重微滴数字PCR拷贝数检测和单核苷酸变异分型 255
第19章 一种用一组预选的SNP监测移植后健康的通用微滴数字PCR方法 264
第20章 采用微滴数字PCR对内源性基因座的基因组编辑所导致的HDR和NHEJ进行检测和定量 276
第21章 采用微滴数字PCR进行DNA甲基化分析 288
第Ⅴ部分 基因表达和RNA定量
第22章 采用微滴数字PCR进行多个选择性剪切mRNA转录本的同时定量 307
第23章 采用微滴数字PCR分析等位基因特异RNA的表达 318
第24章 采用五重微滴数字PCRTM方法对极低丰度的单细胞转录本进行定量 335
第25章 采用微滴数字PCR对循环MicroRNA进行定量 352
第26章 采用微滴数字PCR对血浆和血清中的细胞外MicroRNA进行绝对定量：癌症生物标志物hsa-miR-141的定量 363
第Ⅵ部分 分隔的其他用途
第27章 微滴数字PCR用于二代测序文库的质控检测 379
第28章 使用数字PCR定相DNA标志物 389
第29章 ddTRAP：一种敏感且准确定量端粒酶活性的方法 407
第30章 采用微滴数字PCR的分隔功能进行高效和可靠的DNA适配体分选：Hi-Fi SELEX方法 421