生物医学实验

本书从系统训练学生从事生物科学与医学工程综合实验研究技能的角度，系统编排了50个实验，构成三个模块，即生物分子实验、细胞组织实验和纳米材料实验。生物分子实验以生物技术中的基因上程为主线，系统编排17个实验，教授学生熟悉和掌握三类生物大分子——DNA、RNA和蛋白质的基本制备和检测分析技术。细胞组织实验以细胞为实验核心，编排22个实验，教授学生熟悉和掌握细胞相关的基本实验技术，包括细胞培养、细胞器的分离和各种细胞组分的制备及检测分析技术，同时涵盖组织水平检测细胞组分的实验技术。纳米材料实验以常见的纳米材料为实验现象，编排11个实验，教授学生熟悉和掌握生物医学工程相关纳米材料学科中常见的纳米材料的制备、表征和生物检测应用技术。这些纳米材料包括铁、金、量子点等无机纳米粒子和脂质体、壳聚糖等有机纳米粒子。本书编写的实验体系，有助于系统培养学生从事牛命科学、纳米材料科学及生物医学工程的实验研究能力。每个实验都按实验口的、实验原理、实验材料、实验步骤、注意事项和示例图片等部分编写，日的是让学生明确每个实验的训练目的，熟悉实验的原理，了解实验所需的各项材料及其功用，掌握成熟细致的实验步骤及实验各环节应注意的事项，以保证实验的质量，同时提供典型实验结果，作为评判实验效果的依据。本书内容系统丰富，适合作为生命科学及生物医学专业本科生和研究生的实验教材和参考资料；同时也可作为科研人员的实验参考手册。

前言
第一篇生物分子实验
实验1动物组织/细胞总RNA的制备及检测3
实验2cDNA的反转录制备11
实验3全长基因编码序列或片段的PCR扩增制备及其半定量PCRl4
实验4GAPDH基因PCR产物的T载休克隆20
实验5细菌培养及CaCl2法制备感受态细胞25
实验6CaCl2转化法质粒转化30
实验7阳性克隆筛选33
实验8质粒DNA的碱裂解法分离纯化43
实验9T载体克隆的DNA序列分析49
实验10质粒DNA的酶切及酶切片段的纯化56
实验1lGAPDH基因表达载体构建60
实验12蛋白表达的SDS-PAGE检测67
实验13蛋白表达的Westernblot检测79
实验14蛋白表达的ELISA测定91
实验15蛋白表达的2-DE检测99
实验16蛋白原核表达产物的纯化110
实验17蛋白原核表达产物的活性分析115
第二篇细胞组织实验
实验18动物细胞培养12l
实验19细胞凋亡及周期的检测128
实验20细胞骨架的观察138
实验21细胞染色体标本制备及吉姆萨染色观察144
实验22细胞染色体荧光原位杂交15l
实验23细胞线粒体及线粒体DNA的制备及检测159
实验24细胞基因组DNA的制备166
实验25细胞基因组DNA小卫星多态性的Southernblot检测173
实验26细胞基因组D\rA微卫星多态性的PCR检测181
实验27细胞基因组DNA中SNP的DNA微阵列芯片检测187
实验28细胞基因组DNA超声剪切及高通量DNA测序文库的制备197
实验29细胞中基因表达的定量PCR检测218
实验30全基因组基因表达的双色基因芯片分析233
实验31全基因组基因表达的单色基因芯片分析241
实验32转录组RNA表达的RNA-Seq测定255
实验33microRNA表达的miRNA-Seq检测269
实验34细胞核蛋白的制备及EMSA分析283
实验35细胞中DNA结合蛋白的ChIP-Seq分析292
实验36动物组织切片的制备及HE染色309
实验37组织中蛋白表达的免疫组化检测314
实验38组织巾核酸分子的原位杂交检测327
实验39组织中核酸分子的原位PCR检测334
第三篇纳米材料实验
实验40纳米金的制备与表征345
实验41纳米金的DNA标记及检测349
实验42量子点的制备357
实验43荧光量子点的DNA标记及检测365
实验44壳聚糖纳米粒制备及荧光标记370
实验45壳聚糖纳米粒基因转移实验375
实验46脂质体的制备和表征379
实验47载药脂质体的制备和表征382
实验48磁性纳米材料的制备及表征387
实验49磁性纳米材料的细胞氧化应激检测394
实验50磁性纳米材料的近红外荧光标记及活体代谢检测410
附录告诫419