缺氧诱导小分子RNA调控肾癌侵袭转移的分析与研究

总序
论丛前言
前言
第1章 GEO中肾透明细胞癌高通量测序数据库的生物信息学分析
1.1 概述
1.2 疾病相关的基因芯片数据库发掘临床肿瘤新标靶
第2章 人肾透明细胞癌中的miRNA表达谱芯片检测及靶基因分析
2.1 材料与方法
2.1.1 实验设备及主要仪器
2.1.2 主要实验试剂及试剂盒
2.1.3 miRNA芯片实验方法
2.2 miRNA芯片数据的分析方法
2.2.1 差异miRNA的筛选
2.2.2 基因功能的显著性分析(GO-Analysis)
2.2.3 基因通路的显著性分析(Pathway-Analysis)
2.3 结果
2.3.1 肾癌标本临床及病理资料
2.3.2 miRNA芯片实验结果和热图分析
2.3.3 肾癌标本中差异miRNAs的靶基因分析
2.3.4 肾癌标本中差异靶基因的显著性功能分析(GO Analysis)
2.3.5 肾癌标本中差异基因的显著性pathway分析和其调控网路分析
2.4 讨论
2.5 结论
第3章 肾透明细胞癌组织中miR-646、相关基因检测及其与肿瘤患者临床相关因素分析
3.1 材料
3.1.1 临床样本
3.1.2 实验用试剂
3.1.3 实验用仪器
3.2 方法
3.2.1 miRNA荧光定量PCR操作流程
3.2.2 靶基因NOB1和SLC4A1检测
3.2.3 靶基因NOB1和SLC4A1的蛋白表达水平检测(Western blot)
3.2.4 免疫组织化学检测NOB1蛋白表达
3.2.5 统计分析方法
3.3 结果
3.3.1 肾透明细胞癌中miR-646和NOB1的表达情况和单变量和多变量风险模型分析
3.3.2 不同级别肾透明细胞癌中NOB1的表达情况及其与临床病理特征的关系
3.4 讨论
3.5 结论
第4章 miR-646靶基因验证及其在肾透明细胞癌中的作用及机制研究
4.1 材料和仪器
4.1.1 细胞系及动物模型
4.1.2 细胞培养基质粒抽提相关试剂盒
4.1.3 实验主要仪器
4.2 方法
4.2.1 靶基因双荧光素酶活性检测
4.2.2 转染后肾癌细胞系和293T细胞中miR-646和相关因的表达水平检测
4.2.3 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞增殖影响的检测(MTT法)
4.2.4 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞迁移的检测(Wound healing法)
4.2.5 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞凋亡的检测(FACS)
4.2.6 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞侵袭的检测(Transwell小室)
4.2.7 血管生成实验(Angiogenesis)，体外条件下肾细胞癌细胞与HUVE(人脐带血内皮细胞)共培养检测血管形成能力
4.2.8 蛋白质芯片检测miR-646对肾透明细胞癌细胞的下游靶基因及通路的相关蛋白表达变化
4.2.9 小鼠成瘤实验检测miR-646和NOBl-shRNA对肾癌细胞裸鼠体内成瘤性的影响
4.3 结果
4.3.1 786-0、ACHN和Caki-2肾癌细胞株中miR的表达水平
4.3.2 miR-646靶基因生物信息学预测
4.3.3 293-T细胞中miR-646靶向调控NOBl的双荧光素酶活性的检测
4.3.4 肾透明细胞癌中过表达或干扰miR-646后对靶基因NOBl基因和蛋白表达的影响
4.3.5 miR-646对肾癌细胞增殖和细胞周期的影响
4.3.6 miR-646对肾癌细胞迁移和侵袭功能的影响
4.3.7 细胞克隆实验检测miR-646对肾癌细胞增殖生长的影响
4.3.8 体外血管生成实验(Angiogenesis)检测miR-646对肾癌细胞血管形成影响
4.3.9 体内实验进一步验证体外细胞功能实验：miR-对肾癌细胞裸鼠成瘤性的影响
4.3.10 miR-646可直接靶向NOB1基因，间接影响SLC4A1基因的表达水平
4.3.11 miR-646靶向NOBl基因对MAPK通路的调控机制
4.4 讨论
4.5 小结
第5章 总结与展望
5.1 结论
5.2 进一步工作的方向
参考文献
后记
附录综述