生物化学与分子生物学实验教程

前言
第一章实验室规章制度和实验记录、实验报告1
一、实验室规章制度1
二、实验室安全及防护2
三、实验记录和实验报告3
(一)实验记录3
(二)实验报告3
四、生物化学与分子生物学实验的绘图要求、方法及实验数据处理分析方法4
(一)实验报告中的图表4
(二)实验数据的处理与分析6
第二章实验室常用仪器设备、常用试剂及常用实验技术9
一、实验室常用玻璃仪器的介绍9
(一)常用玻璃仪器9
(二)常用玻璃仪器的洗涤10
二、常用试剂的配制、缓冲溶液与缓冲体系的介绍11
(一)常用试剂配制要点11
(二)实验试剂的使用12
(三)溶液浓度12
(四)缓冲溶液12
三、离心技术14
(一)离心中常用概念14
(二)离心方法16
(三)离心机的构造16
(四)离心机的分类17
(五)离心机使用注意事项17
四、分光光度技术17
(一)原理17
(二)分光光度计的基本结构18
(三)分光光度计的应用18
(四)分光光度计的常用类型18
(五)分光光度计的使用19
五、层析技术20
(一)层析原理20
(二)层析分类22
(三)主要的层析技术24
六、电泳技术32
(一)电泳的基本原理32
(二)影响电泳的因素32
(三)电泳的分类33
(四)常用的电泳技术34
七、PCR技术37
(一)PCR技术的基本原理37
(二)PCR技术操作要素38
(三)PCR技术所需仪器设备41
(四)各种PCR技术的变体42
八、细胞培养技术42
(一)设施器材及培养基43
(二)细胞培养常规操作44
(三)细胞培养具体流程44
(四)注意事项46
(五)细胞培养方式47
(六)细胞培养存在的不足47
九、其他常规仪器设备的使用47
(一)移液器47
(二)酶标仪49
(三)水浴锅51
第三章实验项目53
第一节基础性实验项目53
一、蛋白质定量分析实验53
实验一考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量53
实验二BCA法测定蛋白质含量54
实验三Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量56
实验四紫外分光光度法测定蛋白质含量58
二、层析分离纯化实验59
实验五血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定59
实验六血清脂质的薄层层析62
三、电泳实验64
实验七血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳及定量分析64
实验八心、肝、肾组织乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离66
实验九聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白69
实验十SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量75
四、酶学实验78
实验十一碱性磷酸酶的分离、纯化与比活性测定78
实验十二酶促反应动力学实验83
实验十三MMP-2和MMP-9表达的明胶酶谱分析90
五、物质代谢实验92
实验十四胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响92
实验十五肝糖原的提取与鉴定97
六、分子生物学实验99
实验十六组织细胞基因组DNA的提取99
实验十七质粒DNA的提取、定量、电泳与酶切鉴定101
实验十八核酸含量的测定105
实验十九PCR扩增目的基因109
实验二十DNA琼脂糖凝胶电泳及性内切核酸酶酶谱分析112
第二节融合性实验项目114
一、免疫生化技术114
实验二十一凝集反应114
实验二十二沉淀反应119
实验二十三免疫扩散和免疫电泳125
实验二十四酶联免疫吸附实验131
实验二十五免疫胶体金实验135
二、分子生物学、细胞生物学、生物化学整合实验139
实验二十六培养细胞或组织总RNA的提取及RT-PCR扩增目的基因139
实验二十七培养细胞绿色荧光蛋白基因转染及荧光显微镜检测表达效率146
实验二十八蛋白质印迹(Western blot)实验150
第三节创新性实验项目159
实验二十九基因克隆与重组表达质粒的构建159
实验三十基因重组表达质粒在原核细胞中的表达、纯化与鉴定164
实验三十一基因重组表达质粒在真核细胞中的表达与检测168
实验三十二免疫酶组织(细胞)化学技术172
实验三十三免疫荧光细胞化学技术175
参考文献178