医学细胞分子生物学实验

本教材分为基本实验、综合实验、创新实验、实验视频录像、虚拟实验以及附录。基本实验部分系统介绍了细胞生物学、生物化学、分子生物学和医学遗传学的基本实验技术原理和方法，并根据学科发展前沿，以及实验平台仪器的更新换代和高端仪器的配置情况，更新了分子生物学的全部实验内容，同时对部分实验进行更新替换。综合实验部分是根据科学问题而设置，所采用的实验技术方法融合了三个学科的相关内容，

第一篇基础实验
第一章医学细胞生物学基本实验1
第一节细胞的显微结构1
实验一细胞的一般形态结构观察1
实验二细胞的显微测量技术6
第二节细胞生理活动8
实验三胞质环流8
实验四细胞吞噬9
实验五细胞活性鉴定11
实验六细胞融合12
第三节细胞化学成分的显示14
实验七普通细胞化学15
实验八核酸细胞化学21
实验九酶细胞化学25
实验十荧光细胞化学与免疫荧光细胞化学28
第四节细胞增殖34
实验十一无丝分裂34
实验十二有丝分裂35
实验十三减数分裂39
实验十四X染色质标本制备与观察42
实验十五早熟染色体凝集的诱导和观察43
第五节细胞培养46
实验十六原代细胞培养47
实验十七细胞传代培养49
实验十八体外培养细胞的观察方法53
第二章医学生物化学基本实验59
第一节蛋白定量分析实验59
实验一双缩脲法测定蛋白质含量59
实验二Folin-酚试剂法测定蛋白质含量60
实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质含量61
实验四紫外分光光度法测定蛋白质含量62
第二节层析分离纯化实验64
实验五血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定64
实验六葡聚糖凝胶分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶混合液67
实验七离子交换层析分离混合氨基酸68
第三节电泳分析实验69
实验八血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳69
实验九血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳71
实验十聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清LDH同工酶72
实验十一SDS-PAGE测定蛋白质分子量75
实验十二等电聚焦法测定蛋白质等电点77
第四节酶学实验79
实验十三pH对酶促反应速度的影响79
实验十四温度对酶促反应速度的影响82
实验十五底物浓度对酶促反应速度的影响83
实验十六抑制剂对酶促反应速度的影响85
实验十七酶的提取及比活性测定87
第五节物质代谢实验92
实验十八胰岛素对血糖含量的影响92
实验十九邻甲苯胺法测血糖含量92
实验二十糖酵解中间产物的鉴定93
实验二十一血清中谷丙转氨酶活性的测定95
实验二十二血清脂类含量分析97
第三章医学分子生物学基本实验100
第一节基因克隆实验100
实验一质粒DNA的性酶切反应101
实验二琼脂糖凝胶电泳分离鉴定酶切的线性DNA片段104
实验三DNA酶切片段的回收107
实验四DNA片段的体外连接109
实验五大肠杆菌感受态细胞的制备111
实验六重组DNA的转化及阳性克隆的初步筛选112
实验七阳性重组子的鉴定114
实验八碱裂解法质粒DNA的小量制备115
实验九质粒DNA浓度和纯度的测定117
第二节外源基因GFP在原核细胞中的诱导表达和纯化117
实验十外源基因在大肠杆菌的诱导表达和提取118
实验十一亲和层析法纯化重组蛋白119
实验十二SDS-PAGE鉴定重组蛋白质119
第三节PCR技术121
实验十三PCR扩增目的基因123
实验十四总RNA提取及RT-PCR扩增目的基因124
实验十五实时定量PCR分析真核基因的表达128
第四章医学遗传学基本实验130
第一节细胞遗传学实验130
实验一人类外周血淋巴细胞培养130
实验二人类外周血淋巴细胞染色体的制备131
实验三人类染色体G显带133
实验四人类G显带染色体核型分析134
实验五姐妹染色单体交换（SCE）标本的制备与观察136
第二节分子遗传学实验138
实验六短串联重复序列（STR）的多态性分析138
实验七性片段长度多态（RFLP）分析143
实验八单链构象多态性（SSCP）的检测145
第三节人类遗传性状分析148
实验九遗传性状基因型与表型分析148
实验十遗传病的家系分析和再发风险估计151
第二篇综合实验
第五章细胞增殖活力分析153
第一节细胞增殖的定量分析153
实验一细胞琥珀酸脱氢酶活性检测（MTT法）153
实验二细胞周期的检测154
第二节细胞内ATP含量测定155
实验三人淋巴细胞ATP活力检测155
第三节细胞增殖的染色分析156
实验四BrdU染色法检测细胞增殖156
实验五Ki-67免疫染色法检测细胞增殖157
第六章细胞凋亡的诱导与检测160
第一节细胞凋亡的诱导与形态结构观察160
实验一培养细胞的凋亡诱导161
实验二锥虫蓝染色检测凋亡细胞162
实验三苏木精-伊红染色检测凋亡细胞163
实验四Giemsa染色检测凋亡细胞164
实验五吖啶橙荧光染色检测凋亡细胞165
实验六Ho.33342与PI荧光双染检测凋亡细胞165
第二节凋亡细胞的超微结构观察167
实验七透射电镜观察凋亡细胞167
实验八扫描电镜观察凋亡细胞168
第三节凋亡细胞的定量分析169
实验九流式细胞术检测凋亡细胞169
第四节细胞凋亡的分子生物学特征171
实验十凋亡细胞DNAladder检测172
实验十一Caspase3酶活性测定172
实验十二凋亡相关蛋白表达水平检测173
实验十三凋亡相关基因转录水平的表达检测174
第七章细胞自噬与相关分析178
第一节细胞自噬的形态学分析178
实验一透射电镜观察自噬体的形成179
实验二GFP-LC3自噬斑点的荧光显微镜检测180
第二节自噬标志蛋白的表达分析181
实验三蛋白质印迹法检测自噬标志蛋白的变化181
第八章真核生物基因表达调控分析183
实验一甲基化特异性PCR（MSP）检测基因启动子甲基化183
实验二荧光素酶报告基因瞬时转染分析启动子活性186
第九章四氯化碳致培养肝细胞损伤的分析193
第一节培养肝细胞损伤模型的诱导与形态学分析193
实验一肝细胞损伤的诱导及常规形态检查193
实验二损伤细胞的脂肪变性检测194
第二节肝细胞损伤的定量分析195
实验三CCK法检测细胞存活率196
第三节损伤肝细胞相关酶的分析197
实验四肝损伤细胞乳酸脱氢酶活性检测198
实验五肝损伤细胞谷丙转氨酶活性检测199
实验六肝细胞中PPARγ1表达水平的检测201
第十章人遗传性状基因的分子诊断与应用201
实验一Duchenne型肌营养不良的基因诊断201
实验二多重RT-PCR检测染色体易位202
实验三利用短串联重复序列进行亲权鉴定205
第三篇创新实验
实验一糖尿病的生化及遗传检测分析实验207
实验二唐氏综合征的产前诊断方法208
实验三家族性高胆固醇血症的诊断方法208
实验四血友病的诊断210
实验五重组人促红细胞生成素在细胞中的表达、分离和纯化210
实验六p53基因与肿瘤相关性实验设计211
实验七小鼠组织细胞形态及功能分析212
实验八小鼠组织特种细胞的形态及特征性成分的鉴定212
附录
附录一实验室规则213
附录二实验室安全及防护213
附录三实验室常用玻璃仪器的洗涤与清洁214
附录四生物绘图的要求与方法217
附录五生物学实验设计报告218
附录六常用实验技术原理218