生物技术综合实验

本书的指导思想是使生物学科的学生掌握基本的现代生物技术方法，以分子生物学技术为主线，同时兼顾植物细胞、动物细胞、细菌的的核酸、蛋白的基本研究方法，每一部分即相对独立又相互联系，既有理论原理又有具体的实验方法和操作，同时给出不同的结果如何进行分析，出现的原因和改进方法，培养学生分析问题和解决问题的能力。全书包含四大工程内容，即基因工程、蛋白质工程、细胞工程（植物、动物细胞）和微生物工程的基本理论，基本方法。全书分为五篇，每篇先是基本理论的叙述，然后是具体的实验内容。每个实验包括原理、目的、材料、步骤、注意事项、结果分析和思考题。接近按照学生实验的要求编写。

前言
第1章基因工程技术
1.1基因工程技术基本原理与实践
1.1.1基因工程简述
1.1.2基因工程技术实践
1.2原核生物基因工程技术
1.2.1目的DNA的获得
实验1细菌基因组DNA的制备
实验2植物基因组DNA的制备和分析
实验3动物细胞基因组DNA的制备
实验4PCR扩增目的DNA
1.2.2大肠杆菌质粒载体的制备
实验5碱裂解法
实验6小量一步提取法
实验7试剂盒法
1.2.3载体和目的DNA的酶消化
实验8基因组DNA的酶消化
实验9质粒载体的酶消化
实验10DNA片段的回收纯化
1.2.4载体与目的基因的体外重组
实验11载体和目的基因的体外重组
实验12PCR产物的TA重组
1.2.5重组质粒导人大肠杆菌
实验13CaCl2介导转化法
1.2.6转化菌落的筛选
实验14PCR法快速筛选阳性克隆
实验15菌落原位杂交
1.3真核生物(酵母)的基因工程
实验16酵母基因组DNA的提取
实验17酵母细胞质粒DNA的分离
实验18酵母细胞的转化
实验19酵母单杂交
主要参考文献
第2章蛋白质工程技术
2.1蛋白质工程技术原理
2.2蛋白质工程技术
2.2.1重组蛋白质的表达
实验1重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达
实验2重组蛋白在酵母中的诱导表达
2.2.2重组表达蛋白的分离纯化
实验3金属螯合层析法纯化带组氨酸标签的蛋白质
实验4谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白
实验5从包含体中纯化表达蛋白
实验6利用凝胶过滤层析更换缓冲液
2.2.3蛋白质溶液的浓缩
实验7超滤法浓缩蛋白质溶液
实验8透析法浓缩蛋白溶液
2.2.4蛋白质浓度测定
实验9Bradford检测法
实验10Lowry检测法
2.2.5蛋白质鉴定方法
实验11蛋白质的sDSIPAGE
实验12双向聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验13蛋白质印迹
2.2.6蛋白质的定点突变
实验14重叠延伸产生特异位点突变
主要参考文献
第3章植物细胞工程技术
3.1植物细胞工程原理
3.2植物细胞工程技术
3.2.1植物组织培养技术
实验1植物组织培养常用培养基的配制及灭菌
实验2烟草组织快繁技术
实验3植物细胞悬浮培养技术
3.2.2植物原生质体分离与细胞融合技术
实验4烟草叶片原生质体的分离与培养
3.2.3植物体细胞杂交
实验5电激法诱导植物原生质体融合
实验6聚乙二醇诱导植物原生质体融合
3.2.4植物转基因技术
实验7叶盘法转化烟草
实验8真空渗入法转化拟南芥
实验9基因枪转化水稻愈伤组织
3.2.5转基因植物的鉴定
实验10外源基因整合的鉴定——斑点杂交
实验11利用Southern杂交检测外源基因的整合
实验12植物组织总RNA的提取
实验13利用RT-PCR初步检测外源基因在植物体内的表达
实验14利用实时荧光定量RT-PCR定量检测外源基因在植物体内的表达
实验15gus基因检测
主要参考文献
第4章动物细胞工程技术
4.1动物细胞工程技术原理
4.2动物细胞工程技术
4.2.1细胞培养的准备工作及基本操作
实验1细胞培养的前期工作
实验2细胞培养基的配制
实验3细胞计数及活力测定
实验4细胞传代培养(胰蛋白酶消化法)
实验5细胞的冻存和复苏
4.2.2原代细胞的培养
实验6从小鼠胚胎中分离鼠胚胎成纤维细胞
实验7从鸡胚胎中分离背根神经节细胞
4.2.3细胞系的建立和培养
实验8原代鼠胚胎成纤维细胞的永生化
实验9细胞系的培养
4.2.4DNA导入哺乳动物细胞
实验10与磷酸钙形成共沉淀的DNA转染技术
实验11脂质体介导的DNA转染技术
实验12用电穿孔法导入DNA
实验13运用显微注射法导入DNA
4.2.5检测基因产物的表达
实验14利用绿色荧光蛋白观察特定融合蛋白在细胞内的动态分布
实验15用免疫荧光技术检测特定蛋白质在细胞中的定位
实验16用免疫共沉淀法和免疫印记法检测蛋白质之间的相互作用
实验17用流式细胞仪分析细胞周期的变化
实验18利用双萤光素酶作为报告基因来检测启动子的活性和调控
主要参考文献
第5章微生物工程技术
5.1微生物工程技术原理
5.1.1微生物工程的定义
5.1.2微生物工程的研究内容
5.1.3微生物工程的发展历史
5.1.4发酵工业的特点
5.1.5微生物工程的应用
5.1.6我国发酵工业发展概况
5.2微生物工程技术
实验1菌种的自然选育
实验2土壤中放线菌的选择性分离
实验3发酵菌株的初筛
实验4微生物菌种的保藏
实验5发酵菌种的诱变选育
实验6四环素的定向发酵及效价测定
实验7竹黄菌液体发酵及其活性物质的提取
实验8淀粉质原料的酒精发酵
实验9生长曲线和产物形成曲线的测定
实验10发酵过程中糖的利用
实验11抗生素的分离纯化
实验12发酵污染的检测和判断
实验13酸乳的发酵
主要参考文献