生物技术制药实验指南

本书着重介绍了生物技术制药过程中涉及的重要方法和技术，包括核酸分析技术、蛋白分析技术、组织与细胞培养技术、微生物培养技术、转基因技术、诱变育种技术、生物活性物质的分离检测技术等，读者可根据时间和需要，选取部分实验学习，书后配有附录，方便读者查阅使用。

程玉鹏，博士，副教授，黑龙江中医药大学药学院生物技术教研室主任。曾在加拿大蒙特利尔Bio S&T Inc中心实验室工作，主要从事基因突变，基因合成，蛋白表达等相关研究。现研究方向主要集中在药用植物内生真菌对其宿主次生代谢产物调控的分子机制、微生物生物活性次生代谢产物的分离与药理药效分析。

第一章 实验室管理和安全准则
一、实验室一般要求
二、生物技术实验室规则
三、生物技术实验室的安全管理与注意事项
四、实验室意外事故的紧急处理
第二章 生物技术实验常用仪器及操作规范
一、玻璃器皿
二、塑料制品
三、过滤装置
四、微量移液器及吸头
五、pH计
六、天平
七、离心机
八、恒温箱
九、振荡设备
十、超净工作台
十一、生物安全柜
十二、纯水仪
十三、灭菌设备
十四、紫外-可见分光光度计
十五、热循环仪
十六、电泳仪
十七、凝胶成像系统
十八、流式细胞仪
十九、超声细胞破碎仪
二十、制冰机
二十一、液氮罐
二十二、冰箱
二十三、真空离心浓缩仪
二十四、基因枪
二十五、新一代高通量测序技术
第三章 显微观察技术
一、普通光学显微镜
二、相差显微镜
三、倒置显微镜
四、荧光显微镜
五、激光扫描共聚焦显微镜
六、透射电子显微镜
七、扫描电子显微镜
实验一 细菌显微形态特征观察
实验二 丝状真菌显微形态特征观察
实验三 酵母菌显微形态特征观察
实验四 酵母细胞大小和数量的测定
第四章 缓冲液、培养基的配制及灭菌技术
一、溶液的配制
二、化学品和废弃缓冲液的处理
三、仪器
实验一 MS培养基的配制
实验二 LB培养基的配制
第五章 核酸分析技术
一、储存
二、纯化-除去核酸中的蛋白质
三、核酸的定量
四、浓缩沉淀
五、DNA酶切反应
六、DNA连接
七、电泳
八、聚合酶链式反应
实验一 碱裂解法提取质粒DNA
实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验三 细菌基因组DNA的提取和鉴定
实验四 酿酒酵母总DNA的提取
实验五 植物基因组DNA提取
实验六 动物组织DNA的提取
实验七 采用Trizol溶液提取细菌总RNA
实验八 动物组织mRNA的提取
实验九 DNA的酶切
实验十 DNA的连接
实验十一 脉冲场凝胶电泳（PFGE）
实验十二 RNA琼脂糖变性胶电泳分析
实验十三 真菌ITS序列的PCR扩增
实验十四 菌落PCR
实验十五 DD-PCR技术
实验十六 实时定量PCR
实验十七 Southem印迹杂交
实验十八 Northem杂交技术
实验十九 原位杂交
第六章 蛋白分析技术
一、选择沉淀
二、蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳
三、双向凝胶电泳
四、蛋白浓度检测
实验一 植物中叶片蛋白质的提取
实验二 动物组织蛋白质的提取
实验三 蛋白质的定量（BCA法）
实验四 蛋白质SDS-PAGE电泳
实验五 蛋白质双向电泳
实验六 Western Blotting
实验七 酶联免疫吸附实验
实验八 免疫组化实验
第七章 组织与细胞培养技术
一、动物组织培养
二、植物组织培养
实验一 哺乳动物细胞的原代培养
实验二 哺乳动物细胞的传代培养
实验三 哺乳动物细胞的冻存与复苏
实验四 哺乳动物细胞的融合
实验五 兔脾细胞悬液的制备
实验六 小鼠脾细胞培养实验
实验七 胡萝卜愈伤组织的培养
实验八 植物原生质体的制备
实验九 原生质体分离与融合
第八章 微生物培养
一、细菌培养
二、真核微生物的培养
实验一 药植土壤中根际微生物的分离与计数
实验二 细菌生长曲线的测定
实验三 酿酒酵母海藻酸钙的细胞固定化
第九章 转基因技术
一、细菌转基因
二、酵母菌转基因
三、植物转基因
四、动物转基因
实验一 CaCl2法制备感受态细胞
实验二 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞
实验三 电转化法制备细菌感受态细胞
实验四 基因枪法转化油莱愈伤组织
实验五 农杆菌介导的植物遗传转化
实验六 逆转录病毒感染法制备转基因细胞
实验七 显微注射法制备转基因小鼠
第十章 诱变技术
实验一 大肠杆菌的紫外诱变
实验二 氨基酸营养缺陷型突变株的筛选
第十一章 生物活性物质的分离与检测
实验一 抗生素的微生物检定法
实验二 牛乳中酪蛋白的制备
实验三 γ-球蛋白的分离
实验四 大蒜SOD的分离提取与活力测定
实验五 滑菇多糖的提取制备和鉴定
实验六 凝血酶的制备
第十二章 综合实验
实验一 基因组DNA文库的构建
实验二 突变细胞基因差异表达的研究
附录
主要参考文献