医学科研型研究生常用实验技术与方法

本着常用、基本的编写原则，让医学研究生掌握科研实验的基本功，顺利完成学业

本书是在充分了解医学科研型研究生的实验需求基础上编写的，分为三大部分，共22章。第一部分为实验室通识，包括现代生物医学基础研究的模式和方法、实验室生物安全、科研实验记录书写要求与规范和实验用水、溶液与缓冲液；第二部分为常用实验技术，包括细胞培养常用实验技术、常用实验动物基本知识与操作、蛋白质含量测定和酶联免疫吸附试验、PCR的原理及应用、蛋白质免疫印迹技术原理与操作、免疫细胞与组织化学技术、流式细胞术、分子克隆技术、基因修饰小鼠技术原理、中药有效成分提取分离及干燥技术等；第三部分为专题研究方法，包括细胞凋亡检测常用方法、细胞自噬检测方法、外泌体研究方法、骨代谢生物学研究方法、高效液相色谱在中药研究中的应用、中药网络药理学及常用数据库简介、组学研究方法、动物与细胞实验的系统评价与Meta分析等。本书的读者对象主要为需要开展科研实验的医学硕士生、博士生，还可供从事基础生物医学研究的教师、医师，以及学有所长的医学本科生学习阅读。

戴薇薇，博士，中西医结合生物化学专业，上海中医药大学副教授，龙华医院科技中心实验室主任，从事实验室管理与研究生科研实验教学工作，中医药延缓衰老与防治老年病机制研究。

第一部分 实验室通识001

第一章 现代生物医学基础研究的模式和方法002
一 现代生物医学研究的模式002
二 生物医学基础研究的三种实验系统003
三 围绕“分子生物学中心法则”展开的实验方法体系004

第二章 实验室生物安全006
一 实验室生物安全概念006
二 实验室安全制度管理007
三 实验室化学废弃物的处理010
四 实验室意外事故应急预案012

第三章 科研实验记录书写要求与规范017
一 实验记录的意义017
二 实验记录的原则017
三 实验记录书写规范要求019

第四章 实验室用水，溶液与缓冲液020
一 实验室用水020
二 溶液022
三 溶液的浓度023
四 缓冲溶液026
五 常用缓冲溶液的配制029
六 中药复方和中药单体浓度的计算033

第二部分 常用实验技术035

第五章 细胞培养常用实验技术036
一 原代细胞分离与培养036
二 细胞传代039
三 细胞冻存及复苏042
四 细胞计数045
五 细胞活力检测047
六 细胞转染050
七 常用细胞培养基比较052

第六章 常用实验动物基本知识与操作053
一 实验动物概念053
二 实验动物分类053
三 常规实验动物设施分类和使用056
四 常用实验动物生物学特征057
五 实验动物福利059
六 实验动物基本操作060
七 常用实验动物麻醉操作067
八 实验动物血液标本采集070
九 实验动物其他标本采集073
十 实验动物的尸体剖检和脏器采出075

第七章 蛋白质含量测定和酶联免疫吸附试验077
一 蛋白质含量测定077
二 免疫标记技术与酶联免疫吸附试验079

第八章 PCR的原理及应用083
一 PCR技术083
二 实时荧光定量PCR的原理及应用091
三 miRNA的PCR检测100

第九章 蛋白质免疫印迹技术原理与操作103
一 蛋白质免疫印迹技术原理103
二 蛋白质免疫印迹具体操作步骤110
三 内参抗体的选择114
四 蛋白质免疫印迹实验中的注意事项与常见问题分析114

第十章 免疫细胞与组织化学技术117
一 样本组织制备117
二 组织脱钙119
三 组织切片制作与染色技术120
四 特殊染色技术123
五 免疫组织化学技术127
六 免疫组织化学染色中常见的问题及对策133

第十一章 流式细胞术原理、操作与实验中的应用135
一 流式细胞术概述135
二 流式细胞术的原理136
三 流式细胞术的基本操作143
四 流式细胞术的应用152

第十二章 分子克隆原理与技术操作160
一 分子克隆的基本工具160
二 目标DNA序列的PCR法克隆和酶切法亚克隆164
三 质粒和PCR产物的酶切及琼脂糖凝胶电泳167
四 质粒酶切或PCR产物酶切后的纯化和割胶回收169
五 T4 DNA连接酶介导的质粒和PCR产物的连接反应171
六 质粒的转化、扩增、抽提与鉴定173

第十三章 基因修饰小鼠技术原理177
一 基因编辑概述177
二 Cre／LoxP系统178
三 TALEN系统181
四 CRISPR／Cas9基因编辑系统184

第十四章 中药有效成分提取分离及干燥技术187
一 中药成分的提取方法187
二 中药有效成分的分离方法189
三 中药复方有效成分的提取分离191
四 中药提取液的浓缩方法192
五 中药提取液干燥方法及冷冻干燥技术193

第三部分 专题研究方法197

第十五章 细胞凋亡检测常用方法198
一 细胞凋亡的概念198
二 常用的检测方法198

第十六章 细胞自噬检测方法206
一 细胞自噬概述206
二 自噬的检测方法208
三 细胞自噬检测方法小结217

第十七章 外泌体研究方法219
一 外泌体概述219
二 外泌体的常用提取方法220
三 外泌体的鉴定225
四 外泌体的研究策略227

第十八章 骨代谢生物学研究方法230
一 骨代谢概述230
二 骨组织细胞学和分子生物学230
三 骨代谢细胞生物学研究方法235
四 骨代谢组织生物学研究方法238

第十九章 高效液相色谱在中药研究中的应用242
一 高效液相色谱简介242
二 高效液相色谱仪介绍及使用方法244
三 高效液相色谱法测定中药成分方法的建立246

第二十章 中药网络药理学及常用数据库简介248
一 中药网络药理学及其研究思路248
二 中药网络药理学常用数据库简介251

第二十一章 蛋白质组学、代谢组学技术研究方法266
一 蛋白质组学及其应用266
二 代谢组学及其应用272

第二十二章 动物与细胞实验的系统评价与Meta分析279
一 动物与细胞实验系统评价的现状与意义279
二 动物与细胞实验系统评价的基本过程280
三 动物与细胞实验的检索策略的制定283
四 动物和细胞实验的偏倚风险评估287
五 数据分析291