拟南芥中RNA指导的DNA甲基化(精)/同济博士论丛

DNA甲基化是一个保守的表观机理，在维持基因 组稳定和器官发育方面起到非常重要的作用。刘海亮 、祝建、朱健康著的《拟南芥中RNA指导的DNA甲基化 (精)》通过实验得到了部分数据，通过筛选rosl的抑 制子，确定了RDM1、RDM3、RDM4是RdDM受体复合体中 的新成员，在连接与沉默复合体相关联的小RNA功能 与先前存在或者重新胞嘧啶甲基化中起到至关重要的 作用。

总序 论丛前言 前言 第1章 绪论 1.1 RNA指导的DNA甲基化 1.2 siRNA的产生 1.3 DNA甲基转移酶 1.3.1 MET1 1.3.2 CMT3 1.3.3 重新甲基化酶DRM及不对称甲基化 1.3.4 DNA甲基化复合体 第2章 材料与方法 2.1 实验材料 2.2 方法 2.2.1 植物总DNA的提取(CTAB法) 2.2.2 植物总RNA提取(RNeasy Plant Mini Kit， QIAGEN) 2.2.3 cDNA合成(SuperScript.Ⅲ First-Strand Synthesis System.Invitrogen) 2.2.4 感受态的制备与转化 2.2.5 DNA的回收(离心柱型普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒QIAGEN) 2.2.6 RNA分析 2.2.7 DNA甲基化分析 2.2.8 6xHis-tagged蛋白质纯化(Ni—NTA Fast Start Kit，QIAGEN) 2.2.9 位点突变(QuikChange Site—Directed Mutagenesis Kit.Stratagene) 2.2.10 凝胶阻滞分析(Electrophoretic mobility shift assay，EMSA) 2.2.11 免疫共沉淀 2.2.12 免疫荧光法和显微镜 2.2.13 植物染色体蛋白的免疫染色 2.2.14 染色质免疫沉淀 第3章 结果与分析 3.1 通过筛选rosl的抑制子，确定了RDMl是转录基因沉默途径中的一个新成员 3.1.1 ROSl:植物中去甲基化酶的发现 3.1.2 在rosl突变体背景下，rdml突变体抑制了转基因以及其内源基因的转录基因沉默 3.1.3 rdml-1突变体阻止了RD29A启动子24 nt siRNAs的产生以及抑制了启动子的超甲基化 3.1.4 rdml突变体减少了siRNAs的产生，提高了RdDM途径内源基因的表达水平 3.1.5 rdml突变体减少了RdDM途径内源基因的非CG甲基化水平 3.2 RDMl基因的分离和功能分析 3.2.1 RDMl编码一个小的核蛋白 3.2.2 RDMl结合单链甲基化的DNA 3.3 RDMl是RdDM受体复合体蛋白中的一个组成部分 3.3.1 RDMl与AG04，PolⅡ和DRM2相关联 3.3.2 RDMl与AG04，PolⅡ和DRM2共定位 第4章 RDM3和RDM4 4.1 通过筛选rosl的抑制子，确定了RDM3，RDM4是转录基因沉默途径中的另外两个新成员 4.2 RDM3与AG04，NRPEl相关联，共定位 4.3 RDM4与PolⅡ，Pol V相关联，共定位 第5章 结论与讨论 5.1 rdml突变体对于重新甲基化和siRNAs的影响 5.2 RDM1是RdDM受体复合物中的一员及其可能的功能模式 5.3 RDM3和RDM4 参考文献 附录A RDM1的同源二聚体和rdml-4突变体的特性 附录B DNA探针和引物 附录C 彩图 后记